论文摘要
随着近年来研究的不断深入,越来越多的证据表明PR在乳腺癌细胞的增殖以及乳腺癌的发生与发展中发挥了重要的作用,不仅如此,PR还是甾体类激素依赖式的乳腺癌预后的重要标志物。PR的缺失往往导致乳腺癌发生恶性表型,进而增加对于生长因子的敏感性。大量的实验证据表明,孕激素能够极强地下调PR的蛋白质水平,虽然这种现象已被广泛认可,但其调控的具体机制还不是十分的明确。在本项研究中,我们运用酵母双杂交技术,以PR作为诱饵,在人乳腺cDNA文库中筛选PR相互作用蛋白质。通过大量的筛选及重复验证,我们筛选到两个与PR相互作用的蛋白质,该蛋白质均为CUEDC2。通过生物信息学分析发现,CUEDC2包含一个CUE结构域,其是一个非常小的中度保守的结构域,大约包含40个氨基酸,预测它能和泛素结合,既能识别单泛素化又能识别多泛素化,现在发现它广泛存在于各种真核蛋白质中。到目前为止,CUEDC2的功能尚不十分明确。通过GST pulldown和内外源的免疫共沉淀实验,我们发现CUEDC2能够与PR发生体内外的相互作用。通过泛素化实验,我们发现CUEDC2能够通过泛素蛋白酶体通路促进孕激素诱导的PR降解,用siRNA干涉内源CUEDC2表达后,孕激素诱导的PR降解几乎被完全废除,表明CUEDC2可能在孕激素诱导的PR泛素化降解过程中发挥了重要作用。不仅如此,通过将PRB的388位赖氨酸突变为精氨酸,CUEDC2不能够降解PRB,我们还鉴定出PR的388位赖氨酸位点可能是CUEDC2促进PRB泛素化的靶点。同时,CUEDC2能够通过促进PRB 388位赖氨酸的泛素化进而降低该点的SUMO化,从而削弱了PRB的蛋白稳定性。通过双荧光报告系统测定CUEDC2对PRB的转录活性影响,我们发现了CUEDC2能够抑制PR的转录激活活性,通过流式细胞分析技术,我们发现过表达CUEDC2能够减少孕激素诱导的细胞S期增加,反之,干涉内源CUEDC2的表达后,又能够增加孕激素诱导的S期细胞比例。乳腺癌细胞的增殖过程往往伴随着MAPK通路的激活,我们的实验结果表明,CUEDC2能够抑制由PR激活的MAPK活性,最终阻止了孕激素对乳腺癌细胞生长的影响。综上,我们的结果发现了一个PR翻译后修饰的重要机制。通过该机制控制了PR的蛋白稳定性,并且第一次阐释了CUEDC2抑制乳腺癌细胞增殖的功能,为研究CUEDC2在孕激素受体信号通路中的作用提供了线索。