替米沙坦对高糖环境人血管内皮细胞的保护

论文摘要

目的:研究替米沙坦（telmisartan, TEL）在高浓度葡萄糖（high glucose, HG）诱导的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells, HUVEC）损伤中的作用。探讨替米沙坦对高糖环境下人血管内皮细胞的保护作用。方法:体外培养HUVEC,传至第三代,实验分为空白对照组,高糖组（33.3mmol/L）,高糖+替米沙坦干预组(替米沙坦浓度分别为1×10-8mol/L、1×10-7mol/L和1×10-6mol/L),分别培养2h、12h、24h、36h、48h。MTT法测定高糖组及高糖+替米沙坦组细胞生长的抑制率;选定替米沙坦终浓度1×10-6mol/L,重新将实验分为空白对照组、高糖组、高糖+替米沙坦组及替米沙坦对照组,培养时间同上,收集每一时间点培养液上清,黄嘌呤氧化法测定上清液中超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase, SOD）活力,硫代巴比妥酸法测定丙二醛（Malonaldehyde, MDA）含量,硝酸还原酶法测定一氧化氮（nitrogen monoxidum, NO）含量,放射性免疫法测定内皮素（endothelin, ET）水平。收集培养24h内皮细胞,蛋白质免疫印迹法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome pro liferator activated receptorsγ, PPAR-γ）蛋白表达量。结果:1. MTT测定结果:培养48h后高糖组细胞生长抑制率明显升高（P < 0.05）, 1×10-6mol/L TEL在12 h到48 h之间可明显减缓HUVECs生长抑制率的升高（P < 0.01）;1×10-7mol/L和1×10-8mol/L TEL仅在48h可显著减缓HUVECs生长抑制率的升高（P < 0.01）,表明不同浓度TEL均可减缓高糖对细胞生长的抑制,1×10-6mol/L TEL在12h即可开始发挥作用;2. SOD测定结果:各培养时间点（除2h时刻）高糖组与空白对照组相比,高糖组SOD测定活性明显降低（P <0.05）,替米沙坦干预组SOD测定值高于高糖组（P<0.05）,表明高糖可降低SOD活性,替米沙坦可抑制高糖地作用; 3. MDA测定结果:各培养时间点（除2h时刻）高糖组与空白对照组相比,高糖组MDA含量明显升高（P <0.05）,替米沙坦干预组MDA值低于高糖组（P < 0. 05）,表明高糖可升高MDA含量,替米沙坦可抑制高糖的作用;4. NO、ET测定结果:各培养时间点（除2h时刻）高糖组与空白对照组相比,高糖组NO含量明显降低,ET含量明显升高（P <0.05）,替米沙坦干预组NO含量高于高糖组,ET低于高糖组（P <0.05）,表明替米沙可改善坦高糖对NO、ET的影响;5. PPAR-γ测定结果:实验24h时高糖组与空白对照组相比PPAR-γ含量明显降低（P<0.05）,替米沙坦干预组PPAR-γ含量高于高糖组（P<0.05）,表明替米沙可改善坦高糖对PPAR-γ的影响。结论:高糖抑制HUVEC生长,破坏细胞正常生理功能,替米沙坦可逆转高糖诱导的内皮细胞活性氧产生,增强抗氧化酶活性,维持高糖状态下细胞氧化平衡,维持细胞正常分泌功能并促进PPAR-γ蛋白分泌,提示替米沙坦对高糖状态下的内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能与调节内皮细胞氧化平衡和激动PPAR-γ有关。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 引言
• 1.1 内皮细胞功能
• 1.2 内皮细胞功能障碍
• 1.3 血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂
• 1.4 替米沙坦
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.1.1 细胞
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 其他主要仪器设备
• 2.2 方法
• 2.2.1 试剂配制
• 2.2.2 人脐静脉内皮细胞的体外培养
• 2.2.3 高糖及替米沙坦对细胞的干预及样本收集
• 2.2.4 测定细胞SODM、DAN、O 及ET
• 2.2.5 测定细胞PPAR-γ蛋白表达
• 2.2.6 统计处理
• 第三章 结果
• 3.1 高糖及替米沙坦对细胞干预后细胞生长状况
• 3.2 高糖及替米沙坦对细胞SOD、MDA、NO 及ET 的影响
• 3.2.1 高糖及替米沙坦对细胞SOD 的影响
• 3.2.2 高糖及替米沙坦对细胞MDA 的影响
• 3.2.3 高糖及替米沙坦对细胞NO 的影响
• 3.2.4 高糖及替米沙坦对细胞ET 的影响
• 3.3 高糖及替米沙坦对细胞PPAR-γ蛋白表达的影响
• 第四章 讨论
• 4.1 高糖损伤内皮细胞
• 4.1.1 高糖破坏内皮细胞形态
• 4.1.2 高糖抑制内皮细胞增殖
• 4.1.3 高糖致内皮细胞分泌活性改变
• 4.2 替米沙坦生物学效应
• 4.3 替米沙坦保护内皮细胞的机制
• 4.3.1 替米沙坦改善内皮细胞分泌活性
• 4.3.2 替米沙坦抑制氧化应激
• 4.3.3 替米沙坦激活PPAR-γ
• 4.4 临床利用替米沙坦治疗糖尿病的前景和面临的问题
• 第五章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 攻读学位期间的研究成果
• 附:内皮功能障碍与代谢综合征