系统性红斑狼疮外周血单个核细胞蛋白组学的初步研究

论文摘要

目的:系统性红斑狼疮这一典型的自身免疫性疾病,其病理生理机制的阐明及疾病明确定义的提出一直受到复杂的临床症状和多发性脏器系统受累的阻碍。现行的诊断标准依赖于已出现的临床症状而未强调涉及疾病发展过程的自身免疫状态,而临床症状判断具有主观性:早期非典型症状易被忽略,一旦出现典型的临床症状,患者往往已经伴随明显的免疫系统受损和重要脏器的器质性病变甚至失代偿,预后大大下降,亟需准确有效的早期诊断方法。近年来蛋白组学这一分子生物学的新技术为自身免疫机制的阐明带来了新的方法。随着蛋白组学研究技术的进步,通过对疾病蛋白质水平的综合研究,该学科在分析SLE病理机制、提高早期诊断水平、发现疾病特异性标志物、确定治疗靶位和药物开发等方面表现出独特的优势与前景。目前大部分的研究集中在血清、尿液这两种标本上,较之该领域细胞外液的研究,免疫细胞胞内蛋白组学的研究还处于相对空白的状态。SLE发病机制中涉及多种免疫事件,包含各种免疫细胞参与。我们以包含了T、B、NK细胞等多种免疫细胞在内的外周血单个核细胞（PBMC）为切入点,就SLE对PBMC蛋白表达的影响做一探讨,为运用蛋白组学方法研究SLE的早期发病及提示疾病活动提供依据。方法:分别提取14名SLE患者及9名健康献血者的PBMC,采用双向电泳技术分离全蛋白质组,对部分差异明显、重复性高的蛋白质点进行离子阱高效液相色谱串连质谱分析（Ion Trap HPLC-Chip-MS/MS）,测定其肽序列标签图（PST）,在互联网蛋白质数据库检索鉴定差异蛋白。结果:1.获得了重复性较好的双向电泳图谱。2.图像分析: 1名SLE患者、4名健康献血者PBMC蛋白匹配点为1084个,其中SLE高表达及特异表达蛋白点为71个及17个,健康献血者高表达及特异表达蛋白点为45个及20个。3.对表达差异重复性高的30个蛋白质点进行质谱分析,经数据库检索后,鉴定出28个蛋白质的PST,与27个蛋白质对应,分别为:3-磷酸甘油醛脱氢酶、酪氨酸翻译合成酶、糖原磷酸化酶、转酮醇酶、丙酮酸激酶M1/M2型同功酶、丙糖磷酸异构酶、延长因子1α1、磷酸甘油酸激酶1、α烯醇化酶、斑联蛋白、凝溶胶蛋白前体、脯氨酸丝氨酸苏氨酸磷酸酶相互作用蛋白2、腺苷酸环化酶相关蛋白1、细丝蛋白C、细丝蛋白A、WD重复包含蛋白1、踝蛋白1、微管蛋白β链、整合素耦联蛋白激酶、PDZ-LIM结构域蛋白7、酪氨酸蛋白激酶CSK、破骨细胞刺激因子1、膜联蛋白A5、T复合体蛋白Iζ亚单位、热休克蛋白β1、热休克同源蛋白71和动力蛋白I样蛋白。其中在SLE患者PBMC中高表达或特异表达的有凝溶胶蛋白前体、磷酸甘油酸激酶1、WD重复包含蛋白1、α烯醇化酶、破骨细胞刺激因子1、微管蛋白β链、膜联蛋白A5和热休克同源蛋白71这8类蛋白质,其余均在SLE患者中降低表达或不表达。结论:1.应用蛋白组学技术对SLE患者PBMC特异性蛋白进行初步筛选和鉴定,发现了丙糖磷酸异构酶、膜联蛋白A5、热休克同源蛋白71等27个与SLE发病相关,可能成为SLE生物学标签的蛋白质。2. SLE患者不同的临床症候群可能存在特异性的生物学标签,某些生物学标签只在某一特定的临床症候群中出现,但其确定性尚需后续更完善的实验加以验证。3. SLE患者PBMC蛋白组学研究可能为深入研究其发病机制、建立新的诊断指标提供一个良好的平台。

论文目录

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• 正文 系统性红斑狼疮外周血单个核细胞蛋白组学的初步研究
• 前言
• 病例选择及标本收集
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 全文总结
• 致谢
• 参考文献
• 文献综述 系统性红斑狼疮的蛋白组学研究进展
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间撰写及发表的论文