小鼠原始生殖细胞（PGCs）中组蛋白H2A变体的分布

论文摘要

原始生殖细胞(Prmordial germ cells,PGCs)是生殖细胞的祖细胞,存于8.5～13.5dpc(days post coitum)的鼠胚,具有迁移、增殖和性别分化等特性。近年研究证明PGCs发育过程中发生着大量的DNA及组蛋白的修饰,说明PGCs的特性可能与表观遗传修饰相关,从组蛋白变体角度分析是表观遗传学研究新的热点。本实验通过间接免疫荧光检测了不同发育时期含有PGCs的组织石蜡切片、单细胞及培养两天的PGCs中组蛋白H2A三种变体—macroH2A、H2A.X和H2A.Z的分布。研究结果如下:1免疫荧光检测小鼠PGCs中组蛋白H2A变体的分布分别采集8.5～13.5dpc五个时间段的含有PGCs的胚胎组织和PGCs单细胞,对组织进行石蜡切片间接免疫荧光,对单细胞进行间接免疫荧光检测。macroH2A在PGCs进入生殖嵴(10.5dpc)和性别分化以后(13.5dpc),分布状态发生变化;H2A.X在性别分化后(13.5dpc)分布发生变化;H2A.Z在进入生殖嵴和性别分化过程中(12.5dpc)及以后(13.5dpc)分布发生变动。说明组蛋白H2A的这三种变体确实参与了PGCs的发育。2免疫荧光检测培养后PGCs中组蛋白H2A变体的分布采集主要时间段的小鼠PGCs体外培养两天,分别将体外培养1d和2d的PGCs通过间接免疫荧光检测组蛋白H2A三种变体的分布,以体内同期的PGCs做标准对照,结果发现:macroH2A的分布在培养的细胞中较对照细胞迟缓;H2A.Z分布基本与对照基本一致;H2A.X在培养的进入生殖嵴前(8.5dpc)的PGCs中很快消失,之后各阶段培养的PGCs中H2A.X分布基本正常。另外,实验还发现,11.5dpc时PGCs的性别发育方向可能已确定。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略语的中英文对照
• 第一部分 文献综述
• 第一章 小鼠原始生殖细胞的生物学特性
• 1 PGCs的发育
• 1.1 PGCs的起源
• 1.2 PGCs的迁移与增殖
• 1.3 PGCs的性别决定
• 2 PGCs的生物学特性
• 2.1 PGCs特异表达基因
• 2.2 PGCs基因组的表观修饰
• 3 PGCs的体外培养
• 3.1 饲养层
• 3.2 生长因子
• 第二章 组蛋白变体研究进展
• 1 组蛋白变体及H2A变体的主要特征
• 2 H2A变体的生物学特性
• 2.1 H2A.Z与转录激活有关
• 2.2 H2A.X是DNA损伤修复必需的变体
• 2.3 MacroH2A是异染色质和染色体失活相关变体
• 3 组蛋白H2A变体的替换
• 4 实验目的与意义
• 第二部分 试验部分
• 第三章 鼠胚原始生殖细胞中组蛋白H2A变体的分布
• 引言
• 第一节 石蜡切片的间接免疫荧光研究
• 1.材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 试验结果
• 2.1 不同时期鼠胚组织样的获得
• 2.2 不同胎龄鼠胚PGCs中组蛋白H2A变体的表达
• 第二节 单细胞的间接免疫荧光研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 试验结果
• 2.1 不同日龄鼠胚PGCs中macroH2A的表达变化
• 2.2 不同日龄鼠胚PGCs中H2A.X的表达变化
• 2.3 不同日龄鼠胚PGCs中H2A.Z的表达变化
• 3 讨论与分析
• 3.1 不同时期生殖嵴的形态特征
• 3.2 macroH2A在PGCs发育过程中的分布
• 3.3 H2A.X在PGCs发育过程中的分布
• 3.4 H2A.Z在PGCs发育过程中的分布
• 第四章 组蛋白H2A变体在培养的PGCs中的分布
• 1 引言
• 2 实验材料
• 2.1 实验动物
• 2.2 主要仪器设备
• 2.3 主要试剂和药品
• 2.4 主要试剂的配制
• 3 实验方法
• 3.1 胎儿成纤维细胞饲养层制备方法
• 3.2 小鼠生殖嵴分离培养PGCs
• 3.3 小鼠PGCs的回收
• 3.4 载玻片处理
• 3.5 免疫荧光检测
• 4 实验结果
• 4.1 MEF的培养
• 4.2 PGCs的培养
• 4.3 PGCs中组蛋白H2A变体的免疫荧光检测
• 5 讨论与分析
• 5.1 macroH2A在培养PGCs中的分布
• 5.2 H2A.X在培养PGCs中的分布
• 5.3 H2A.Z在培养PGCs中的分布
• 全文结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 攻读硕士学位期间发表学术论文