成体表皮干细胞分离培养、鉴定及表皮细胞向干细胞方向逆分化的初步研究

成体表皮干细胞分离培养、鉴定及表皮细胞向干细胞方向逆分化的初步研究

论文摘要

目的 1、熟练掌握体外成体表皮干细胞与成熟表皮细胞的分离、培养及其鉴定。初步地研究其生物学特性。 2、研究诱导因素对成体表皮细胞的分化影响。 3、采用皮片移植模型,来探讨成熟表皮细胞向干细胞逆向分化的可能性。 方法 (取标本时,已征得患者本人同意。) 1、通过dispase Ⅱ酶消化成人包皮,采用差速黏附法,分别获得ESC及成熟表皮细胞,利用MTT比色法和细胞计数法来观察细胞的增殖传代情况;利用免疫组化观察ESC及成熟表皮细胞的角蛋白表达差异;初步研究其生物学特性。 2、将体外培养的成熟的表皮细胞,添加EGF、血清、表皮干培养基等多种诱导因子,通过显微镜观察、细胞流式等检测皮肤表面标志物(角蛋白)不同表达,应用TRAP法检测端粒酶活性的变化来分析细胞的分化状况;同时通过导入hTERT来获得永生化的成体表皮干细胞。 3、通过用DAPI标记的超薄刃厚皮片移植至全层皮肤缺损的裸鼠创面,分别于第3、5、7天取材,制作冰冻切片,行免疫组化染色,在双荧光显微镜下观察成熟表皮细胞逆向分化现象的存在。

论文目录

  • 缩略语表
  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 前言和文献回顾
  • 主要材料与方法
  • 实验一:成体表皮细胞分离、培养与鉴定
  • 1.材料和方法
  • 2.结果
  • 3.讨论
  • 实验二:多种诱导因素对成体表皮细胞分化的影响
  • 1.材料和方法
  • 2.结果
  • 3.讨论
  • 实验三:移植超薄皮片中细胞逆向分化的实验研究
  • 1.材料和方法
  • 2.结果
  • 3.讨论
  • 小结
  • 参考文献
  • 附图
  • 个人简历和研究成果
  • 致谢
  • 相关论文文献

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