复方双苓止泻散对腹泻大鼠小肠黏膜修复及AQP4表达的影响

论文摘要

腹泻是许多疾病都可引起的一种症状,其病理基础为肠道在感染或非感染因素刺激下,黏膜发炎、水肿,肠分泌及运动功能亢进。短期剧烈腹泻可引起脱水和电解质紊乱,危及生命;持久腹泻则严重影响机体消化吸收功能。适当给予止泻药物,可尽快缓解症状、减少并发症的发生,研究治疗腹泻的药物对防治腹泻具有重要意义。复方双苓止泻散是一种纯中药制剂,具有抗炎、抑菌、免疫调节、治腹泻及腹痛等功效。万鑫母仔快康已在畜牧业中推广使用,临床主要应用于细菌、病毒等引起的肠炎及仔猪痢疾等病证。本研究参照周干南法建立SD大鼠腹泻模型,将60只SD大鼠随机分为:腹泻模型组(DM),低(0.31 g/kg,L)、中(0.62 g/kg,M)、高(1.24 g/kg,H)剂量复方双苓止泻散治疗组、万鑫母仔快康治疗组(阳性对照药物0.62 g/kg, PC)及正常对照组(NC),每组10只。用药48 h后,取材近段小肠组织,通过观察比较各组大鼠小肠黏膜组织形态及AQP4的表达水平,初步探讨复方双苓止泻散的作用机制、确定该有效部位的药用价值和适宜药量。旨在利用天然中草药替代抗生素治疗腹泻,减少排泄物对环境的污染,为畜牧业健康养殖技术的推广提供重要理论基础。本实验分为二部分:一复方双苓止泻散促进腹泻大鼠小肠黏膜组织形态恢复目的肠黏膜不仅是肠道发挥正常消化吸收功能的物质基础,还是保护机体免受细菌、毒素等有害物质侵袭的内在屏障。肠黏膜屏障功能首先依赖于肠黏膜的完整性,上皮细胞的形态结构和功能对肠黏膜机械屏障的完整性有重要作用。本部分研究观察比较各组大鼠小肠黏膜组织形态学变化,为揭示复方双苓止泻散的作用机制及适宜剂量提供实验依据。方法应用HE染色、扫描电镜和透射电镜技术分别观察腹泻模型及各治疗组大鼠小肠黏膜组织形态和上皮细胞的超微结构变化,并应用Motic 6.0数码医学图像分析系统测量并比较各组小肠绒毛的平均高度、宽度和面积。结果1 HE染色观察结果NC组大鼠近端小肠绒毛形态规整,绒毛中轴内少量间质,绒毛单层柱状上皮排列整齐、极少量嗜酸性变,上皮之间或绒毛顶端偶有淋巴细胞浸润。DM组中多数小肠绒毛明显水肿,部分绒毛融合;绒毛中轴间质明显水肿、充血、渗出、大量淋巴细胞等炎性细胞浸润;柱状上皮细胞之间界限不清、有较多嗜酸性变以及淋巴细胞浸润,部分绒毛上皮坏死、脱落;黏膜固有层肠腺之间的间质内也有较多炎性细胞浸润,但未见隐窝脓肿;肌层、浆膜完整。L组肠绒毛水肿、毛细血管充血和炎性细胞浸润现象仍较明显,肠腔内可见脱落的绒毛组织。PC组大鼠小肠绒毛受损结构明显恢复,部分绒毛顶端仍可见柱状细胞与间质分离,甚至缺失,少量毛细血管充血、淋巴细胞浸润。M组、H组大部分小肠绒毛内仅见极少量渗出及淋巴细胞浸润,柱状上皮细胞排列整齐。2小肠绒毛测量结果2.1绒毛宽度:DM组大鼠小肠绒毛宽度较其余5组,明显增大(P<0.01);各治疗组绒毛宽度均减小:M组、H组、PC组与NC组之间无显著性差异(P>0.05),但L组大鼠小肠绒毛宽度仍明显大于NC组(P<0.01)。2.2绒毛高度:DM组、L组、M组和PC组,四组大鼠小肠绒毛高度无显著性差异(P>0.05),均大于NC组小肠绒毛高度(P<0.01);而H组与NC组之间无显著性差异(P>0.05)。2.3绒毛面积:DM组大鼠小肠绒毛面积明显大于其余5组(P<0.01),差异显著;各治疗组小肠绒毛面积均减小,其中M组、H组与NC组无显著性差异(P>0.05),但L组、PC组大鼠小肠绒毛面积明显大于NC组(P<0.01);PC组大鼠小肠绒毛面积明显大于L组(P<0.01)。3扫描电镜观察小肠绒毛形貌特征NC组小肠绒毛大小较一致、排列整齐,表面光滑;柱状细胞分布均匀,微绒毛排列整齐。DM组大量小肠绒毛破损、结构紊乱;大量柱状细胞缺失,微绒毛结构破坏。经药物治疗后,各组小肠绒毛破损少见,L组肠绒毛明显水肿,表面附有较多粘液;PC组小肠绒毛水肿不明显,但排列欠规则;M组、H组小肠绒毛呈舌状,大小较一致、排列较规则,偶见绒毛破损;大部分柱状细胞微绒毛排列整齐。4透射电镜观察绒毛上皮细胞超微结构结果NC组小肠上皮细胞排列整齐,细胞器结构清晰,细胞微绒毛长而密集、排列整齐;偶见凋亡的上皮细胞。DM组小肠上皮细胞明显水肿,大部分线粒体明显肿胀,可见嵴断裂、减少、消失,甚至外膜溶解导致空泡化;部分内质网扩张;柱状细胞微绒毛断裂、脱落、数量减少。L组、PC组小肠黏膜上皮细胞的细胞器结构较DM组有较大改善:只有细胞游离端的胞质水肿、细胞器少;大部分线粒体双层单位膜清晰,嵴数量有所增加,但部分嵴模糊不清,部分线粒体仍明显肿胀;小肠上皮微绒毛较DM组数量增多,排列较整齐。M组、H组上皮细胞内大部分细胞器结构恢复,微绒毛结构恢复,排列整齐。二复方双苓止泻散对腹泻大鼠小肠黏膜AQP4表达的影响目的探讨AQP4在腹泻过程中的作用及复方双苓止泻散对AQP4表达的影响。方法本部分实验应用免疫组织化学、Western blot方法比较各组大鼠小肠黏膜内AQP4的表达。结果1免疫组织化学染色结果AQP4免疫阳性表达产物为棕黄色颗粒。全部实验大鼠近段小肠黏膜组织中均有AQP4表达的阳性细胞,AQP4蛋白极性表达在小肠黏膜深部肠腺细胞的细胞膜上,杯状细胞未见到阳性着色。DM组大鼠小肠黏膜中AQP4的表达明显减少;各治疗组大鼠小肠黏膜中AQP4表达增多。2 Western blot分析结果DM组小肠黏膜中AQP4表达最少(P<0.01),各药物治疗组大鼠小肠黏膜中AQP4表达增多。L组大鼠小肠黏膜中AQP4表达水平明显高于DM组(P<0.01),但低于M组和PC组(P<0.01)。M组和PC组大鼠小肠黏膜中AQP4的表达量低于NC组,具有显著性差异(P<0.01),H组大鼠小肠黏膜中的AQP4蛋白表达量增多最明显,与NC组无显著性差异(P>0.05)。结论复方双苓止泻散有效地使大鼠腹泻症状消失,能明显促进恢复小肠绒毛的损伤结构,其主要作用包括使炎性细胞浸润减少,绒毛中轴间质内充血、渗出减轻及绒毛水肿减轻;促进绒毛上皮细胞器的超微结构恢复正常,促进黏膜上皮细胞的增殖与恢复,从而加快腹泻大鼠小肠黏膜结构与功能的恢复。在促进小肠黏膜修复过程中,中、高剂量复方双苓止泻散及万鑫母仔快康的治疗效果优于低剂量复方双苓止泻散;中剂量与高剂量复方双苓止泻散的治疗效果无明显差异;但中、高剂量复方双苓止泻散的治疗效果优于万鑫母仔快康。AQP4蛋白极性表达在小肠黏膜深部肠腺细胞的细胞膜上,杯状细胞未见到阳性着色。AQP4参与调节SD大鼠小肠的液体转运。腹泻大鼠小肠黏膜中的AQP4表达明显减少。复方双苓止泻散有效停止腹泻,各治疗组大鼠小肠黏膜中的AQP4表达上调,推测AQP4还可能与参与腹泻大鼠肠黏膜的恢复过程。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 研究论文 复方双苓止泻散对腹泻大鼠小肠黏膜修复及AQP4表达的影响
• 引言
• 第一部分 复方双苓止泻散促进腹泻大鼠小肠绒毛组织形态恢复
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 第二部分 复方双苓止泻散对腹泻大鼠小肠黏膜AQP4 表达的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 附图
• 附表
• 讨论
• 小结
• 参考文献
• 综述一
• 综述二
• 致谢
• 个人简历