论文摘要
犬窝咳是由犬支气管败血波氏杆菌（Bordetella bronchiseptica,Bb）犬腺病毒（CAV）、犬瘟热（CDV）和犬副流感病毒（CPiV）中的一种或几种病原混合感染引起的。本实验主要目的是了解犬支气管败血波氏杆菌在窝咳犬中的分布,分析比较Bb分离株的生物学特性,并同时比较三种病毒在窝咳犬中的检出。从南京地区和北京地区采集了164份患有窝咳的犬鼻腔拭子进行Bb的分离鉴定,经培养性状、形态学检查、生理生化试验、血清学鉴定及PCR鉴定,最终分离到16株Bb,分离率为9.8%,药敏试验结果显示16株细菌生物学特性和对抗生素敏感性基本相同。对16份Bb阳性病料样品进行犬腺病毒、犬瘟热、犬副流感病毒检测,结果表明窝咳犬由Bb引发的几率占10%,和三种病毒混合感染的情况者占81%。对2006年11月至2008年1月在北京和南京地区分离的16株犬波氏杆菌和一株兔波氏杆菌参考株的fimN基因进行了全长克隆,用MegAlign（DNAStar）比较分析分离株与GenBank中收录的犬波氏杆菌参考株（登录号AF231910）的fimN核苷酸序列,绘制基因进化树。结果表明,16株支气管败血波氏杆菌的fimN基因序列同源性与犬波氏杆菌参考株序列的同源性在99%以上,和兔波氏杆菌参考株的序列同源性也在99%以上,表明南京和北京两地的犬源支气管败血波氏杆菌的fimN核苷酸序列基本无变化。对克隆载体pMD18T-fimN进行双酶切,将得到的630bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-32a（+）中,构建PETBb-fimN重组质粒表达载体,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21中,在37℃1mM IPTG诱导下该片段获得良好的表达。经SDS-PAGE鉴定其表达的融合蛋白质约39.4kDa,与预期值一致。免疫转印试验显示,体外表达的该重组蛋白可被兔支气管败血波氏杆菌NK0610株兔抗血清识别。表达蛋白纯化后免疫实验兔,通过琼脂扩散试验测血清抗体效价,结果显示血清的沉淀效价为1:40,表明该重组蛋白具备天然菌毛蛋白N基因的部分抗原表位,为研制CDV的亚单位疫苗提供了侯选材料。
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相关论文文献
- [1].兔支气管败血性波氏杆菌fimN基因的原核表达[J]. 浙江农业学报 2011(05)
- [2].兔波氏杆菌fimN蛋白间接ELISA抗体检测方法的建立[J]. 中国预防兽医学报 2013(11)
标签：犬支气管败血波氏杆菌论文; 分离鉴定论文; 克隆表达论文; 免疫原性论文;