论文摘要
目的研究乙肝后肝硬化患者外周血CXC家族ELR+趋化因子IL-8、ELR-趋化因子IP-10及相关基因表达,肝活检组织ELR+趋化因子IL-8、ELR-趋化因子IP-10及相关基因IL-8 mRNA、IP-10 mRNA的表达,及IP-10受体CXCR3在肝活检组织和外周血中表达,探讨ELR+、ELR趋化因子相互关系及在乙肝后肝硬化发病机制中的作用。方法筛选典型HBV感染后肝硬化患者,以ELISA法检测患者血清IL-8、IP-10蛋白水平;Real-time PCR检测PBMC及肝活检组织中IL-8 mRNA、IP-10mRNA含量,以lg cDNA/lg GAPDH代表其最终mRNA水平。用SP免疫组化染色观察肝活检组织内IP-10及其相关受体CXCR3的表达,在激光共聚焦显微镜下,运用免疫荧光双套染色法标记的抗体进一步观察FITC标记CXCR3和Cy3标记IP-10在PBMC和肝组织中的表达与分布情况。结果肝硬化患者血清IL-8、IP-10表达水平分别为（432.4±77.5）pg/ml、（299.3±61.2）pg/ml较正常对照组明显升高,差异有统计学意义（P＜0.01）;PBMC内IL-8mRNA、IP-10 mRNA表达水平分别为（1.1134±0.2025）lg cDNA/lg GAPDH、（0.7479±0.1495）lg cDNA/lg GAPDH,显著高于正常对照组（P＜0.01）;肝活检组织中二者基因表达水平升高,分别为（1.3651±0.2216）lg cDNA/lg GAPDH、（0.8563±0.1506）lg cDNA/lg GAPDH,与肝外伤患者组相比差异有统计学意义（P＜0.01）,且血清内IL-8水平与PBMC、肝活检组织内IL-8 mRNA表达相关（r=0.567,0.498,P＜0.01）,同时血清IP-10水平与PBMC、肝活检组织IP-10 mRNA表达亦有相关性（r=0.464,0.557,P＜0.05）。肝硬化患者血清HBV-DNA（+）组血清IL-8、IP-10蛋白水平分别为（462.6±91.2）pg/ml、（342.3±80.3）pg/ml,明显高于HBV-DNA（-）组（P＜0.01,P＜0.05）;HBV-DNA（+）组PBMC内IL-8 mRNA、IP-10mRNA表达水平分别为（1.2212±0.2207）lg cDNA/lg GAPDH、（0.8465±0.1528）lgcDNA/lg GAPDH,较HBV-DNA（-）组表达水平升高（P＜0.05,P＜0.01）;同时肝活检组织IL-8 mRNA、IP-10 mRNA也呈高表达,分别为（1.5028±0.2207）lg cDNA/lgGAPDH、（1.0024±0.1517）lg cDNA/lg GAPDH（P＜0.01,P＜0.01）,血清IP-10水平、PBMC及肝组织IP-10 mRNA与HBV-DNA表达明显相关（r=0.636,0.703,0.620,P＜0.01）,血清IP-10水平、PBMC及肝组织IP-10 mRNA与HBV-DNA表达明显相关（r=0.796,0.750,0.633,P＜0.01）。ALT、AST升高者血清IL-8、IP-10及PBMC、肝活检组织中IL-8、IP-10 mRNA明显升高,与相应转氨酶正常组相比,差异有统计学意义（P＜0.05,P＜0.01）;血清IL-8表达与升高组ALT水平、升高组AST水平、AST/ALT比值显著（r=0.543,0.542,0.507,P＜0.05或P＜0.01）。血清IP-10表达与升高组ALT水平、升高组AST水平、AST/ALT比值显著相关（r=0.630,0.578,0.648,P＜0.01）;升高组中肝活检组织IP-10 mRNA表达与升高组ALT水平、升高组AST水平、AST/ALT比值亦显著相关（r=0.639,0.686,0.704,P＜0.01）。SP免疫组织化学染色显示肝硬化患者肝活检组织IP-10及其受体CXCR3表达增强;CXCR3主要表达于浸润的炎性细胞,主要分布于肝组织汇管区、纤维组织增生区及肝坏死区。IP-10在肝硬化患者肝活检组织中主要表达于肝小叶中窦状内皮细胞,且主要聚集于坏死的肝细胞区,且IP-10在HBV-DNA（+）组及转氨酶升高组呈高表达。利用激光共聚焦显微镜可分别检出CXCR3和IP-10发出的绿色荧光和红色荧光,IP-10和CXCR3在PBMC及肝活检组织浸润的炎性细胞均有表达,且二者具有共定位（黄色显示）。PBMC涂片染色结果显示肝硬化患者CXCR3表达强度高于正常对照者,肝活检组织涂片IP-10表达强度高于肝外伤患者者。结论肝硬化患者外周血及肝活检组织IL-8、IP-10及其mRNA表达增高,其表达水平与肝内HBV复制水平、肝细胞损伤程度密切相关。IP-10主要表达于肝小叶窦状内皮细胞,且主要聚集于坏死的肝细胞区。IL-8、IP-10参与肝内局部炎性浸润,在介导肝炎后肝硬化进展中起重要作用。肝硬化患者体内IL-8、IP-10表达可能存在动态平衡。
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