HCV湖北株全基因组克隆

论文摘要

丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus, HCV）是输血后及散在性的非甲非乙型肝炎（Non-A, Non-B Hepatitis, NANBH） 主要病因。缺乏可以在实验室内稳定扩增病毒的细胞系统和动物模型严重阻碍了HCV 病毒本身的研究发展和由其感染引起的疾病的治疗方法的研究进步。各国科学家一方面致力于扩增病毒的细胞系和动物模型的发展,另一方面利用分子生物学的手段对HCV 开展了基础性的研究。在如今分子生物学研究发展迅猛的背景下,HCV 的研究水平也很快得到了很大提高。本研究通过分段RT-PCR 的方法分段得到了HCV 的全基因组克隆,分析得到所获得的克隆为1b亚型并且与HCV-Shanghai最为接近;通过对所采集的HCV阳性血清UTR 进行测序分析,得到目前在武汉地区流行的主要HCV 基因型为1 型。另外采用杆状病毒系统在昆虫细胞中表达HCV 结构蛋白E1,并采用Confocal 显微镜观察E1 在昆虫细胞中的表达分布。本论文包括以下三个章节: 第一章对HCV 的发现、其基因组结构和基因型的特点和分布、检测手段、治疗方法和E1 蛋白做了简要综述,对利用杆状病毒表达系统表达外源蛋白的广泛应用作了简要介绍。第二章描述了采用分段RT-PCR的方法从湖北省HCV 感染阳性病人血清中克隆得到了HCV 的全基因组,通过软件对其进行基因型和进化树的分析。最终认为所克隆的HCV 基因组为1b 亚型,与目前在NCBI 上发布的HCV-Shanghai株亲缘关系最为接近。但是在比较中发现在湖北株内有363 nt 的缺失,而同时又替换了285nt。在基因组内这285nt 替换了NS5b 的C 端和3’UTR 的前端。而替换的285nt 中有153nt 位与NS5b 内而剩余132nt 位于3’UTR 内。通过分析发现替换序列在结构上与原序列相似,但是功能分析有待进一步的实验证实。第三章通过克隆得到HCV UTR 和core 的部分基因,测序分析和软件对比

论文目录

• 第一章 引言
• 第二章 HCV 湖北株全基因组克隆
• 第三章 武汉市 HCV 流行病学初步分析
• 第四章 HCV 结构蛋白 E1 在昆虫细胞中的表达和定位
• 第五章 结论
• 参考文献
• 发表文献目录
• 致谢