利用噬菌体肽库技术筛选猪生长激素抗原模拟表位

论文摘要

猪生长激素是垂体分泌的多肽激素,与生长发育和繁殖功能有关,大量研究证明,猪生长激素能显著提高猪生长速度、瘦肉率和饲料报酬,对猪的生产、育种和饲料的调配产生重大的影响。本实验室对猪生长激素的研究是针对抗原表位的研究。本研究主要结果如下：1.用实验室制备的杂交瘤细胞,注射到液体石蜡免疫一周后的经产BALB/c小鼠,腹水采用辛酸-饱和硫酸法进行粗提,再经层析系统纯化蛋白,最后用SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳检测其纯度,间接ELISA测定其OD490值,杂交瘤细胞培养上清效价为1：1600,制得的小鼠腹水效价为1：1.6×1042.用猪生长激素单克隆抗体作为靶蛋白,对噬菌体随机12肽库进行了四轮淘洗,噬菌体克隆回收率从1.1×10-8增加到1.0×10-2,目标噬菌体克隆得到了有效富集。随机挑取47个蓝色噬菌斑扩增后,经间接ELISA检测,发现有9个噬菌斑克隆与单克隆抗体有较强的特异性结合,将该9个阳性克隆提取ssDNA进行序列测定及比对分析,结果中有7个阳性克隆的外源肽序列完全一致,与氨基酸序列进行比对,得到同源序列NxxxTSx。这些模拟表位对猪生长激素表位研究具有一定的参考价值。为进一步分析猪生长激素的结构与功能的研究奠定基础,

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 猪生长激素概述
• 1.2 单克隆抗体技术原理及在研究中的应用
• 1.3 抗原表位研究方法的应用及进展
• 1.4 噬菌体展示技术的原理及其在抗原表位研究中的应用
• 1.5 研究目的和意义
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 第三章 结果与讨论
• 3.1 单克隆抗体腹水及培养上清效价的测定
• 3.2 猪生长激素单克隆抗体的纯化结果
• 3.3 噬菌体展示肽库亲和淘选结果
• 3.4 筛选噬菌体图片
• 3.5 间接ELISA鉴定阳性噬菌体克隆
• 3.6 噬菌体单链DNA的测序结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附录