C225联合多西他赛在人胃癌细胞株MGC803及BGC823中的体外研究

论文摘要

目的:1、通过体外观察C225及与细胞毒性药物多西他赛联合对胃癌细胞株MGC803和BGC823增殖的影响,评估药物联合效应并探讨最佳联合方案。2、通过观察C225及与多西他赛联合对胃癌细胞生长周期的影响及相关蛋白表达的变化,探讨最佳联合顺序方案的作用机理。方法:将MGC803及BGC823人胃癌细胞株于37℃、5% CO2条件下进行培养。1、待细胞呈对数生长,接种于96孔培养板,设空白对照组、C225组、多西他赛组及C225+多西他赛联合组,经不同给药浓度及顺序处理后应用MTT法检测C225及与多西他赛联用对细胞增殖的影响,并计算两药联合效应,找出最佳联合给药顺序;2、将细胞接种于6孔板,设置空白对照组、C225组及最佳的联合给药浓度及顺序处理组,应用流式细胞术检测细胞凋亡周期。3、以Western-Blotting蛋白免疫印记法,分析最佳的联合给药浓度及顺序处理前后EGFR及其下游分子p-38MAPK、p-AKT表达的变化情况。结果:1、MTT比色结果显示:C225单药作用,随着给药浓度从0.1ug/ml-1000 ug/ml递增,其对人胃癌MGC803及BGC823细胞株的抑制作用呈现逐渐增强的趋势,但未显出明显的量-效关系;多西他赛单独作用对人胃癌MGC803及BGC823细胞株的抑制呈明显量-效关系;C225与多西他赛联合作用时,能在一定程度上增加多西他赛的肿瘤抑制作用;多西他赛先于C225给药的序贯给药优于其它给药顺序。2、流式细胞术分析结果提示:C225诱导人胃癌MGC803及BGC823细胞株G0/G1期阻滞,S期的细胞比例减少,从而促进肿瘤细胞的凋亡。3、Western-Blotting检测结果显示:C225与多西他赛序贯联合作用时,能下调人胃MGC803及BGC823细胞株EGFR信号通路相关蛋白p-38MAPK、p-AKT的表达从而达到抑制细胞增殖作用。结论:1、C225与多西他赛联合作用时,在一定程度上可增强其对人胃癌MGC803、BGC823细胞株的生长抑制效应;多西他赛先于C225给药的序贯给药顺序优于其他联合顺序。2、C225与多西他赛序贯顺序作用的机制可能为:多西他赛可上调EGFR表达水平,增强C225对EGFR信号传导通路及其通路下游的相关蛋白p-38MAPK、p-AKT的表达的抑制,进而抑制细胞增殖,增加细胞G0/G1期阻滞,促进肿瘤细胞的凋亡。3、C225在人胃癌细胞中的研究为C225单独或与其他细胞毒性药物联合用于临床胃癌的治疗提供了理论依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料与方法
• 2.1 细胞株
• 2.2 试剂与材料
• 2.2.1 药物
• 2.2.2 细胞培养试剂
• 2.2.3 MTT 试剂
• 2.2.4 Western-blotting 试剂
• 2.3 主要溶液成分及配制
• 2.3.1 细胞培养常用试剂溶液配置
• 2.3.2 MTT 试剂配置
• 2.3.3 Western-blotting 试剂溶液配置
• 2.4 主要仪器与设备
• 2.5 研究方法
• 2.5.1 细胞培养
• 2.5.2 MTT 实验
• 2.5.2.1 原理
• 2.5.2.2 步骤
• 2.5.2.3 处理方法
• 2.5.3 流式细胞学检测细胞周期分布
• 2.5.4 Western-Blotting 检测蛋白
• 2.5.5 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 MTT 比色法测定药物对细胞增殖的影响
• 3.1.1 不同浓度 C225 的吸光值及抑制率
• 3.1.2 多西他赛单药组与联合组吸光值及抑制率的比较
• 3.1.3 多西他赛与 C225 联合不同给药顺序组抑制率的比较
• 3.2 流式细胞学检测 C225 及最佳给药方案对细胞周期的影响
• 3.3 Western-Blotting 检测最佳给药顺序作用前后蛋白的变化
• 第4章 讨论
• 4.1 C225 单药及其与多西他赛联合对MGC803 及BGC823 细胞株增殖的研究
• 4.2 C225 及其与多西他赛序贯给药作用机制的研究
• 4.2.1 流式细胞学检测细胞周期的影响
• 4.2.2 Western-Blotting 检测相关蛋白表达的变化
• 第5章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果