CD44与糖酵解相关分子在胃癌中的表达及意义

论文摘要

目的：研究CD44与糖酵解相关分子在胃癌中的表达特点,探讨其在胃癌发生发展过程中可能的作用机制。方法：Western blot检测低氧（1%O2）培养24h,48h和72h,GES-1和MKN-45中CD44、HIF-1α、ENO1、PKM2、GAPDH、c-Myc、p53和Bcl-2的表达水平,与正常氧浓度条件下的表达作对照;采用免疫组织化学法检测收集的63例胃癌组织和对应的正常胃组织标本中CD44、HIF-1α、ENO1和PKM2的表达水平；运用统计学方法分析CD44,HIF-1α与临床病理参数之间的关系。结果：GES-1和MKN-45中CD44 24h的表达高于对照组,随着缺氧培养时间的延长表达显著下降,同时HIF-1α随着缺氧时间的延长表达逐渐增高,MKN-45中ENO1,PKM2和GAPDH的表达随着缺氧时间的延长显著增高,GES-1与其相反；MKN-45中c-MYC和Bcl-2的表达明显高于对照组和GES-1,其缺氧培养24h时p53的表达明显高于对照组,但是随着缺氧培养时间的延长表达显著下降。免疫组织化学染色发现CD44的阳性表达率为71.4%（45/63）,HIF-1α的阳性表达率为61.9%（39/63）,胃癌组织中CD44和HIF-1α的表达均与病人的年龄、性别和肿瘤的位置无相关性(（P＜0.05）,而与肿瘤的大小、分化程度、临床分期及是否有淋巴结转移显著相关（P＜0.05）,另外CD44与HIF-1α的表达呈正相关（P＜0.05）。结论：胃癌缺氧微环境中CD44、HIF-1α、糖酵解代谢酶、c-Myc、p53和Bcl-2等共同调节胃癌细胞对缺氧微环境的适应,并促进胃癌的发生发展,推测CD44、HIF-1α和糖酵解相关分子等有可能成为胃癌诊断和治疗的新的蛋白标志物,但具体机制有待于进一步研究证实。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 英文缩写词表
• 第一章 前言
• 1.1 胃癌和肿瘤微环境的研究现状
• 1.2 CD44的研究现状
• 1.2.1 CD44的结构和生物学特性
• 1.2.2 CD44的生理功能
• 1.2.3 CD44与肿瘤的关系
• 1.2.4 CD44与胃癌关系的研究
• 1.3. HIF-1α的研究现状
• 1.3.1 HIF-1α的结构和生物学特性
• 1.3.2 HIF-1α的生理功能
• 1.3.3 HIF-1α与肿瘤的关系
• 1.3.4 HIF-1α与胃癌的关系
• 1.4 烯醇化酶（enolase）与肿瘤
• 1.5 PKM2（丙酮酸激酶肿瘤型）与肿瘤
• 1.6 c-Myc与肿瘤
• 1.7 p53与肿瘤
• 1.8 E-ca和Bcl-2与肿瘤
• 1.9 课题来源
• 1.10 立题依据
• 1.11 主要研究内容
• 第二章 材料和方法
• 2.1 临床资料
• 2.2 实验试剂
• 2.3 细胞培养试剂的配制
• 2.4 Western blot试剂的配制
• 2.5 免疫组化液体的配制
• 2.6 主要仪器
• 2.7 实验方法及过程
• 2.7.1 常规细胞培养及厌氧培养
• 2.7.2 贴壁细胞总蛋白的提取方法
• 2.7.3 Bradford比色法测定蛋白浓度
• 2.7.4 Western-blot原理与具体操作步骤
• 2.8 免疫组织化学法原理与具体操作步骤
• 2.8.1 免疫组化的基本原理
• 2.8.2 组织切片制备及常规HE染色步骤
• 2.8.3 免疫组化染色步骤
• 2.9 免疫组织化学结果的判断
• 2.10 统计学分析
• 第三章 结果
• 3.1 倒置显微镜下细胞形态学观察
• 3.2 蛋白定量的标准曲线绘制
• 3.3 Western-blot转膜后SDS-PAGE考染图
• 3.4 Western blot分析
• 3.5 免疫组织化学染色结果
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 5.1 主要结论
• 5.2 研究展望
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢