海藻糖抑制淀粉质β多肽聚集的实验研究

论文摘要

伴随着全球人口老龄化步伐的加快,阿尔滋海默症（AD）的发病人数逐年剧增,已经仅次于癌症和心脏病。目前,阿尔兹海默症成为危害人类健康和生活质量的第三大杀手。由于AD的发病是淀粉质多肽（Aβ）聚集的后果,而Aβ16-22又是Aβ聚集的重要疏水性核心,因此具有重要研究价值。为了观察Aβ在聚集过程中各种聚集体和寡聚体的形成特点和海藻糖对聚集的抑制作用,本文以Aβ16-22作为模型多肽,利用毛细管电泳法分别考察在水溶液和海藻糖溶液的Aβ16-22聚集过程及聚集过程中寡聚体的形成特点;并利用质谱和超滤方法对不同时间的培养产物进行了鉴定;同时利用透射电镜对海藻糖抑制聚集的作用及对聚集过程的影响进行了表观形貌的观察,得到以下结果。首先,利用毛细管电泳考察了Aβ16-22的性质。发现其具有很强的疏水性和较高的等电点（pI=10-11）,由此特点要求毛细管电泳需在较低的pH值条件下（pH 2.3的40 mM的磷酸缓冲液）进行,以实现样品的完全分离。第二,分析Aβ16-22不同培养时间产物的毛细管电泳结果发现,在合适的条件下,应用毛细管电泳能使多肽的不同寡聚体分开,甚至得到基线分离。用质谱和超滤的方法对多肽的聚集体进行鉴定,得出多肽的寡聚体中有分子量为3755的四聚体的存在。第三,考察了海藻糖对Aβ16-22聚集的影响。分别用毛细管电泳方法和透射电镜成像法考察了不同浓度海藻糖对多肽聚集的影响,结果发现,海藻糖对Aβ16-22聚集有很强的抑制效果。在不加海藻糖的培养物中,培养3天时,单体含量只有16%;而在添加1 mM海藻糖的培养物中,Aβ16-22的单体含量仍然有70%,单体含量提高了3倍多,且海藻糖的添加存在一个最适的抑制浓度。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 引言
• 1.1.1 Aβ的产生
• 1.1.2 Aβ的聚集特性
• 1.1.3 Aβ的研究现状
• 1.2 Aβ聚集研究中的一些检测手段
• 1.2.1 毛细管电泳技术
• 1.2.2 透射电子显微镜的基本原理
• 1.3 海藻糖简介
• 1.3.1 海藻糖分子特性
• 1.3.2 海藻糖的应用
• 1.4 本文的主要研究内容
• 第二章 毛细管电泳对Aβ16-22 聚集过程的分析
• 2.1 实验材料和设备
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 溶液配制
• 2.2.2 毛细管处理
• 2.2.3 Aβ16-22 样品的制备
• 2.2.4 Aβ16-22 等电点的测定
• 2.2.5 Aβ16-22 的聚集过程
• 2.2.6 Aβ16-22 的疏水性验证
• 2.3 结果与讨论
• 2.3.1 Aβ16-22 的等电点
• 2.3.2 Aβ16-22 聚集过程的分析检测
• 2.3.3 Aβ16-22 的疏水性验证
• 2.4 小结
• 第三章 海藻糖抑制Aβ16-22 聚集研究
• 3.1 实验材料和设备
• 3.1.1 实验材料
• 3.1.2 实验设备
• 3.2 实验方法
• 3.2.1 毛细管电泳法
• 3.2.2 质谱法
• 3.2.3 超滤法
• 3.2.4 透射电镜成像法
• 3.3 实验结果与讨论
• 3.3.1 毛细管电泳分析
• 3.3.2 质谱分析
• 3.3.3 超滤产物分析
• 3.3.4 透射电镜成像分析
• 3.4 小结
• 第四章 结论与展望
• 4.1 结论
• 4.2 展望
• 参考文献
• 致谢