论文摘要
目的：1.近些年来乳腺癌和卵巢癌的发生和死亡均呈现升高的趋势,不同患者的疗效和毒性反应的个体差异显著,成为癌症治愈率低下的主要限制性因素,药物治疗相关的药物代谢酶、药物转运体、信号转导受体和药物靶标的多态性则与疗效和毒性的个体差异密切相关。单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism, SNP）作为第三代遗传标记,已经广泛应用于基因功能和疾病的相关性研究当中,药物使用和疾病治疗相关的SNP信息将为癌症治疗提供有价值的信息。因此开发SNP的检测方法将为临床检验提供帮助。本文在本实验室前期对SNP检测的研究基础上,建立了一种基于酶试剂的对SNP进行检测的方法。2.临床药物间相互作用主要是药物代谢酶介导的代谢性药物相互作用。紫杉醇与其他抗肿瘤药物联合使用发生药物间相互作用已被临床研究发现,而具体的作用机制尚未阐明。由于紫杉醇主要经CYP2C8催化的6α-羟基化作用进行解毒,因此我们对CYP2C8催化的6α-羟基化反应作为体外研究的对象,探讨紫杉醇与其它抗肿瘤药物间的相互作用是否由CYP2C8的抑制作用介导。方法：1.检测方法通过设计一对探针对SNP位点进行识别,采用了虾碱性磷酸酶、外切酶Ⅰ、Pfu DNA聚合酶和Taq DNA连接酶四种主要试剂,通过Pfu DNA聚合酶-Taq DNA连接酶的聚合-连接作用,来达到对靶SNP位点的特异性识别；采用外切酶Ⅰ对反应体系中多余检测探针对进行降解,抑制假阳性扩增。最后通过对聚合连接产物的PCR扩增放大检测信号完成样本的基因分型。2.对环磷酰胺、异环磷酰胺、吉西他滨、依托泊苷和拓扑替康5种与紫杉醇联合使用的抗肿瘤药物进行体外药物抑制实验,利用人肝脏微粒体对其进行代谢,通过高效液相色谱对代谢产物6α-羟基紫杉醇进行检测,计算各种药物对CYP2C8的抑制率,分析各种抗肿瘤药物的抑制程度。结果：1.非小细胞肺癌样本的琼脂糖凝胶电泳分型结果与直接测序的结果一致,对突变杂合子能进行准确的识别。经过不断优化,检测成本得以降低,检测周期缩短,操作步骤得以简化。2.体外抑制实验结果显示,5种与紫杉醇合用的抗肿瘤药物浓度在10μM时没有对紫杉醇6α-羟基化反应产生明显抑制作用,进一步实验发现各药物的半数抑制浓度（IC50）均大于100μM。结论：1.本SNP检测方法可以满足临床检测快速、灵敏的需要,是临床检测中可以选择的一种成本较低的方法。2.药物体外抑制实验证实临床上与紫杉醇联合用药发生的药物相互作用不是由CYP2C8抑制作用介导的,而具体的药物相互作用机制还需要考虑包括其它药物代谢酶和药物转运体等更多因素,需要更多的体内或体外研究予以阐释。