表达性载体pGEX-6p-1-hri的构建以及人核糖核酸酶抑制因子对BALB/c小鼠肝癌和鸡胚血管生成的抑制作用

论文摘要

人核糖核酸酶抑制因子（Human Ribonuclease Inhibitor, hRI）是广泛存在于哺乳动物细胞浆中的一种酸性糖蛋白,分子量为50kD,其基因位于染色体11p15.5,三级结构呈对称的马蹄型。hRI是核糖核酸酶A（Ribonuclease A, RNase A）的抑制剂,可以有效地抑制其对RNA的水解作用。血管生成因子（Angiogenin,Ang）属RNase A超家族成员。根据cDNA序列分析,Ang与RNase A有35%的同源性。hRI能与Ang以1:1的化学剂量紧密结合(Ki=7.1×10-16M)。动物实验进一步证实,hRI具有抑制动物体内移植瘤生长的作用。本实验室前期已进行了大量的工作,我们从人胎盘和猪肝中提取hRI,给予荷瘤小鼠后可以抑制乳腺癌实体瘤Ca761,肉瘤S180的生长。从组织中提取的该蛋白产量较少,成本高,不宜大批量生产,生产工艺复杂,化学性质不稳定,生物半衰期短,成为其临床应用的瓶颈。本试验针对其特点,给单体RI蛋白加上谷胱甘肽转移酶（GST）标签,构建成融合表达蛋白（GST-hRI）,并将二者进行对比。结果发现融合蛋白（GST-hRI）无论在活性保持,半衰期延长方面都有显著提高;探索最优条件下融合蛋白（GST-hRI）的可溶性表达及其生物学作用。同时将上述纯化的GST-hRI用于动物实验,将BALB/C小鼠接种肝癌H22后,用该蛋白质进行处理。通过荷瘤小鼠抑瘤实验结果表明,治疗组的血管计数、肿瘤大小及恶性程度与空白组有显著差异。同时融合蛋白（GST-hRI）和RI组两种蛋白之间疗效上也有差异。将七天龄鸡胚分别施以GST-RI和hRI以检测其生物学作用,结果发现两者明显抑制鸡胚血管生成,并存在差异。

论文目录

• 一、正文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 第一部分 表达性载体 pGEX-6p-1-hri 的构建
• 材料
• 方法
• 结果
• （五） 第二部分 GST、RI 及 GST-hRI 融合蛋白的提取与纯化
• 材料
• 方法
• 结果
• 结论
• （六） 第三部分 GST-RI 及 RI 两种蛋白对荷肝癌 H22 的小鼠的保护 和对鸡胚血管生成的抑制作用
• 一.对荷肝癌 H22 的 BALB/c 小鼠的保护作用
• 材料
• 方法
• 结果
• 结论
• 二.蛋白对鸡胚血管生成的抑制
• 材料
• 方法
• 结果
• 结论
• 讨论
• （七） 附录
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 综述
• （二） 参考文献
• 三、致谢