论文题目: 木聚糖硫酸酯化条件及木聚糖硫酸酯抗凝血活性研究
论文类型: 硕士论文
论文专业: 发酵工程
作者: 韩亮
导师: 陶文沂
关键词: 水不溶性木聚糖,硫酸酯化,抗凝血活性,构效关系
文献来源: 江南大学
发表年度: 2005
论文摘要: 多糖具有提高免疫能力、抗病毒、抗肿瘤及抗氧化等生物学活性,对多糖的研究越来越受到人们的重视,其中硫酸酯多糖由于其抗凝血、抗HIV等多种病毒的作用,尤为受到关注。玉米芯木聚糖是一种来源丰富的生产木寡糖的原料,在经过衍生化以后具有一定的生物活性。本文主要对玉米芯木聚糖的提取,水不溶性木聚糖的硫酸酯化条件,酯化衍生物的抗凝血活性及抗凝血机制等进行了研究。经碱提法从玉米芯中提取得到水溶木聚糖（wsX, water soluble xylan）和水不溶木聚糖（wisX, water insoluble xylan）,二者比例约为1:2,单糖组分主要以木糖为主。采用氯磺酸-吡啶法对wisX进行硫酸酯衍生化,经正交和单因素分析得到最佳酯化条件为:氯磺酸和吡啶摩尔比1:2,酯化温度80℃,反应时间6h,酯化产物wisX-S6取代度1.62,分子量约为1.0×105,经DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析柱分离得到一个水溶性好的白色絮状固形物。通过紫外光谱分析发现wisX-S6在282nm处有新的特征吸收峰,红外光谱分析发现在波数1256cm-1和814 cm-1处分别出现S=O和C-O-S键的特征吸收峰。通过APTT、PT和TT实验发现wisX-S6具有抗凝血活性,其作用途径为内源性和共同凝血途径。初步探讨了wisX-S6的抗凝机制为,通过与ATIII结合形成复合物,激活ATIII,使ATIII由慢速抑制剂变为快速抑制剂,灭活凝血酶。另外还发现wisX-S6可以抑制纤维蛋白原向纤维蛋白的转化过程,其作用机理是大分子的wisX-S6可以与纤维蛋白原结合从而堵塞了凝血酶与其结合或者是改变了其构象,使凝血酶无法与其结合。wisX-S6在给药浓度5μg/mL下,对血小板的最大聚集抑制率为4.8%,不会产生内出血副作用。本论文还研究了wisX-S6的硫酸取代度、分子量、糖链侧链基团与抗凝血活性之间的关系。木聚糖分子链上通过硫酸化反应引入的硫酸基团是硫酸化木聚糖的主要活性基团,硫酸基团必须达到一定的含量才具有抗凝活性,在达到此取代度后,抗凝活性与硫酸基含量成正相关性。分子量和抗凝血活性之间不存在相关性,但是分子量必须大于10000才具有抗凝血活性。侧链糖基组成对多糖硫酸酯的抗凝血活性有一定的影响,葡萄糖醛酸和乙酰基能提高硫酸酯的抗凝血活性。
论文目录:
中文摘要
英文摘要
第一章 绪论
1.1 木聚糖
1.1.1 木聚糖性质及来源
1.1.2 木聚糖的提取
1.1.3 木聚糖的生物活性
1.2 多糖的硫酸酯化研究
1.2.1 硫酸酯多糖及其生物活性研究
1.2.2 多糖硫酸酯酯化方法
1.2.3 硫酸酯化木聚糖及其生物活性研究进展
1.2.4 多糖硫酸酯的抗凝血构效关系以及抗凝机制
1.3 本论文立题意义和主要研究内容
第二章 木聚糖的提取及硫酸酯化
2.1 实验材料和仪器
2.1.1 实验材料
2.1.2 主要实验仪器
2.2 实验方法
2.2.1 木聚糖提取
2.2.2 总糖还原糖测定
2.2.3 玉米芯木聚糖组分气相色谱(GC)分析
2.2.4 wisX 硫酸酯化
2.2.5 硫酸基含量测定
2.2.6 木聚糖硫酸酯层析分离纯化
2.3 结果与讨论
2.3.1 玉米芯木聚糖提取得率及组成分析
2.3.2 硫酸酯化结果
2.3.3 wisX-56 层析纯化结果
2.4 本章小结
第三章 木聚糖硫酸酯wisX-56抗凝血活性及其机制初探
3.1 实验材料和仪器
3.1.1 实验材料
3.1.2 主要仪器设备
3.2 实验方法
3.2.1 血浆制备
3.2.2 活化部分凝血活酶时间(APTT)的测定
3.2.3 凝血酶时间(TT)的测定
3.2.4 凝血酶原时间(PT)的测定
3.2.5 凝血过程动力学实验
3.2.6 发色底物法测不同体系中凝血酶活性
3.2.7 样品对纤维蛋白原生成纤维蛋白的影响实验
3.2.8 wisX-56 对血小板聚集的影响
3.3 结果和讨论
3.3.1 抗凝血常规指标测试结果
3.3.2 凝血和抗凝血动力学结果
3.3.3 发色底物法凝血酶活性的结果
3.3.4 wisX-56 对纤维蛋白原生成纤维蛋白的影响
3.3.5 wisX-56 对血小板聚集的影响
3.4 本章小结
第四章 木聚糖硫酸酯的理化性质和构效关系研究
4.1 实验材料和仪器
4.1.1 实验材料和试剂
4.1.2 实验仪器
4.2 实验方法
4.2.1 纯度检验
4.2.2 硫酸基团的物理法检验
4.2.3 高效渗透色谱法(HPGPC)测定分子量及其分布
4.2.4 木聚糖硫酸酯构效关系分析
4.3 结果与讨论
4.3.1 纯度鉴定
4.3.2 琼脂糖电泳分析
4.3.3 紫外光谱扫描图谱分析结果
4.3.4 红外光谱分析结果
4.3.5 高效渗透色谱法(HPGPC)测定分子量及其分布结果
4.3.6 木聚糖硫酸酯构效分析
4.4 本章小结
主要结论
参考文献
附录一
致谢
攻读硕士学位期间发表论文情况
发布时间: 2006-07-20
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