黄精中三萜皂苷和活性多糖的分离与鉴定

论文摘要

黄精（Polygonatum sibiricum Red.）在我国分布广泛,资源丰富,是一种具有很大开发潜力的食疗中药。本文以黄精为研究对象,探索其皂苷和多糖的组成及其所具有的生物活性,为进一步开发利用奠定基础。称取25kg黄精,粉碎后用70%乙醇,料液比1:7,回流提取2h,滤出液体,重复3次,滤液合并浓缩得乙醇提取物。将乙醇提取物依次使用石油醚和正丁醇进行萃取,所得正丁醇提取物通过AB-8大孔吸附树脂柱,依次用水、20%95%乙醇进行梯度洗脱,流出液采用薄层层析法检测后分为九个部分。选取C、D、E部分反复使用ODS柱和MCI柱层析法,乙醇梯度洗脱,薄层层析法检测,从中分离得到两种化合物。通过核磁共振法鉴定出这两个化合物的结构分别为2β,3β（OH）2-（28→1）葡萄糖-（6→1）葡萄糖-（4→1）鼠李糖-乌苏酸（积雪草苷）和2β,3β,6β（OH）3-（28→1）葡萄糖-（6→1）葡萄糖-（4→1）鼠李糖-乌苏酸（羟基积雪草苷）。这两种化合物在黄精中均未见报道。滤渣加6倍量水微沸提取两次,每次3小时,过滤,合并浓缩滤液,用95%乙醇沉淀,重复3次,收集沉淀,用无水乙醇反复洗涤,得黄精多糖粗品。对黄精多糖进行了降血糖活性的研究,结果表明黄精多糖对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠有明显的降血糖作用。黄精多糖通过AB-8大孔吸附树脂柱,依次用水和75%乙醇洗脱,流出液采用薄层层析法检测后分为A、B和C三个部分。选取A部分继续采用DEAE-纤维素柱分离,并依次用水和0.1mol·L-1NaCl溶液洗脱,薄层层析法检测分为三个部分。其中后两个部分分别用Sephadex G-100柱和HW-40柱层析法分离,并用水洗脱,薄层层析法检测,得到一种较纯的多糖。结合气相色谱法对其单糖组成进行分析,并运用核磁共振法对其结构进一步分析,可推测该化合物的结构为以β-1,2相连的酮糖构成主链,且有葡萄糖以α构型连在酮糖上。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 黄精概况
• 1.1.1 黄精的来源
• 1.1.2 黄精的资源分布
• 1.1.3 黄精的药用历史
• 1.1.4 黄精的化学成分
• 1.1.5 黄精的药理作用
• 1.1.5.1 抗衰老作用
• 1.1.5.2 降血脂作用
• 1.1.5.3 降血糖作用
• 1.1.5.4 免疫调节作用
• 1.1.5.5 对心血管系统的作用
• 1.1.5.6 抗炎、抗病原微生物
• 1.1.5.7 抗动脉粥样硬化
• 1.1.5.8 提高和改善记忆
• 1.1.6 黄精的开发利用现状
• 1.1.6.1 黄精药物的开发利用
• 1.1.6.2 黄精在保健食品中的应用
• 1.1.6.3 黄精作为观赏园林植物
• 1.1.6.4 黄精在化妆品中的开发利用
• 1.2 黄精皂苷的研究现状
• 1.3 黄精多糖的研究现状
• 1.4 立题背景和意义
• 1.5 主要研究内容
• 第二章 黄精中皂苷的提取分离
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料与仪器
• 2.2.1 材料与试剂
• 2.2.2 仪器与设备
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 黄精皂苷的提取
• 2.3.1.1 提取方法的选择
• 2.3.1.2 提取溶剂的选择
• 2.3.1.3 萃取
• 2.3.1.4 黄精皂苷的提取
• 2.3.2 黄精中皂苷的分离
• 2.3.2.1 薄层层析[58]
• 2.3.2.2 大孔吸附树脂柱层析粗分
• 2.3.2.3 ODS 柱层析粗分
• 2.3.2.4 MCI 柱层析细分
• 2.3.3 纯度鉴定
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 黄精皂苷的提取
• 2.4.2 大孔吸附树脂柱层析粗分
• 2.4.3 ODS 柱层析粗分
• 2.4.4 MCI 柱层析细分
• 2.4.5 纯度鉴定
• 2.4.6 黄精中皂苷的提取分离流程
• 2.5 本章小结
• 第三章 黄精中乌苏酸型皂苷的结构鉴定
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料与仪器
• 3.2.1 材料与试剂
• 3.2.2 仪器与设备
• 3.3 实验方法
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 化合物Ⅰ的结构鉴定
• 3.4.2 化合物Ⅱ的结构鉴定
• 3.5 本章小结
• 第四章 黄精多糖降血糖活性的研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料与仪器
• 4.2.1 材料与试剂
• 4.2.2 仪器与设备
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 黄精多糖的提取
• 4.3.1.1 提取方法的选择
• 4.3.1.2 黄精多糖粗品的提取
• 4.3.2 糖尿病动物模型的建立
• 4.3.3 黄精粗多糖对糖尿病小鼠血糖的影响
• 4.3.4 统计学处理[70]
• 4.4 结果与讨论
• 4.4.1 黄精多糖的提取
• 4.4.2 糖尿病动物模型的建立
• 4.4.3 黄精粗多糖对糖尿病小鼠血糖的影响
• 4.5 本章小结
• 第五章 降血糖活性多糖的提取分离与结构初探
• 5.1 引言
• 5.2 实验材料与仪器
• 5.2.1 材料与试剂
• 5.2.2 仪器与设备
• 5.3 实验方法
• 5.3.1 黄精多糖的提取
• 5.3.2 黄精多糖的分离
• 5.3.2.1 薄层层析
• 5.3.2.2 大孔吸附树脂柱层析粗分
• 5.3.2.3 DEAE-纤维素柱层析
• 5.3.2.4 Sephadex G-100 柱层析
• 5.3.2.5 HW-40 柱脱盐
• 5.3.3 纯度鉴定
• 5.3.4 黄精多糖的单糖组成分析
• 5.3.4.1 多糖水解
• 5.3.4.2 乙酰化衍生物的制备
• 5.3.4.3 气相色谱分析条件
• 5.3.5 核磁共振法分析
• 5.4 结果与讨论
• 5.4.1 薄层层析
• 5.4.2 大孔吸附树脂柱层析粗分
• 5.4.3 DEAE-纤维素柱层析
• 5.4.4 Sephadex G-100 柱层析
• 5.4.5 HW-40 柱层析脱盐纯化
• 5.4.6 纯度鉴定
• 5.4.7 黄精多糖的提取分离流程
• 5.4.8 黄精多糖的单糖组成分析
• 5.4.9 黄精多糖的结构分析
• 5.5 本章小结
• 主要结论
• 问题与展望
• 致谢
• 参考文献
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文
• 附图