HP-PRRSV分离株在抗体压下传代突变株的致病特性及免疫保护性能的研究

论文摘要

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的猪的一种高度接触性传染病。自1987年首次在美国暴发以来,目前已遍布全球各主要养猪国家。2006年夏季,我国南方部分地区在高温高湿季节发生了以感染猪繁殖与呼吸综合征病毒为主要病原同时伴发多种病原引起的猪“高热病”,随后猪“高热病”在山东及全国发生流行,给养猪业造成前所未有的损失。本研究对高致病性蓝耳病山东分离株SD0612在抗体选择压下传代致弱毒株回归猪的感染状况、病理变化、免疫反应及对PRRSV强毒人工感染的保护作用进行了系统的研究。为了比较SD0612原始株及其在抗体选择压下突变株在回归猪体后的抗体动态变化,初步探讨其作为疫苗候选毒株免疫猪后的安全性及对强毒的抵抗能力。我们先后进行了两次动物试验。在第一次试验中,将15头健康猪分为五组,分别为SD0612原毒感染组、有抗体条件下第一次传40代突变株F40感染组及有抗体条件下再次传40代突变株e40感染组、无抗体条件下再次传40代突变株a40感染组及阴性对照组,分别于接毒后1w、2w、3w、4w、5w采血,收集血清以ELISA试剂盒测定其抗体水平。剖检死亡猪及到期剖杀猪,取病料固定,石蜡切片,HE染色,镜检。结果显示：F40在接种猪后引起的ELISA抗体较原始株迟缓,约滞后一周左右。而e40和a40诱发的抗体和F40未见明显区别。四个毒株比较后发现,SD0612原始株感染猪后引发的ELISA抗体始终是最高的,显示其在体内的复制能力最强和抗原性最好。SD0612原始株接种组迅速出现高致病性蓝耳病的典型病症,于接种10-13天后死亡,剖检及病理组织学病变也完全符合高致病性蓝耳病的典型病变。而三株突变株除一过性发烧外,未见其它症状,剖检也未见明显的眼观病变,但镜检1/3的猪见肺泡壁轻度增厚,少量淋巴细胞浸润,肝细胞轻度颗粒变性及水泡变性,各毒株间未见明显的差异,表明突变株的致病力显著下降,已成“非致病性”弱毒株,但安全性可能还存在一定的问题。为了比较F40、e40及a40接种猪体后对强毒攻击的免疫保护作用,进行了第二次试验,将20头猪分为四组,分别为F40接种组、e40接种组、a40接种组及阴性对照组,在第40天时接种强毒,于攻毒后1w、2w、3w、4w、5w采血,收集血清以ELISA试剂盒测定其抗体水平变化,测量体温,观察其发病表现,并到期剖杀试验猪,采取组织病料做石蜡切片,光镜下观察不同组织器官特别是肺脏、淋巴组织及大脑的组织病理学变化。结果显示：F40接种猪经强毒攻击后引起的ELISA抗体升高幅度较e40组迟缓,升高的幅度也低于e40组。尽管个别猪出现了一过性的发热现象,肺有极轻微的炎症反应,但F40诱发的免疫力足以经受强毒的攻击,显示F40虽然在某些位点发生了一些氨基酸的变化,但其抗原性与原始株仍在较近的范围内。a40接种猪经强毒攻击后引起的ELISA抗体变化与F40接种组基本相同,本组强毒攻击后的症状表现及病理变化与F40组也基本相同,同样具有良好的免疫保护作用,说明其抗原性未再发生明显变化。而e40接种猪经强毒攻击后ELISA抗体升高快且显著高于F40、a40接种组；e40接种组虽然未有死亡,但在3-10天期间均出现了高热症状,且表现严重的精神沉郁、食欲不振等,e40诱发的免疫未能有效保护实验猪经受强毒的攻击,这从一个侧面反映了e40较F40特别是原始株抗原性发生了更大的变化。三个毒株比较后发现,a40或F40能够保护免疫猪经受强毒的攻击,安全性高,是极具开发价值的候选疫苗毒株。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1. 猪繁殖与呼吸综合征病毒的基本结构及其生物学特性
• 1.1 PRRSV的基本结构
• 1.2 PRRSV的理化特性
• 1.3 PRRSV的生物学特性
• 1.4 PRRSV的生物学结构
• 1.4.1 PRRSV的基因组结构
• 1.4.2 PRRSV的主要蛋白
• 1.4.2.1 PRRSV的非结构蛋白
• 1.4.2.2 PRRSV的主要结构蛋白
• 1.4.2.3 PRRSV的次要结构蛋白
• 2 PRRSV的遗传变异
• 2.1 结构蛋白编码区的变异
• 2.2 非结构蛋白编码区的变异
• 2.3 PRRSV的抗原性变异
• 3 PRRSV病毒的免疫学特点
• 3.1 体液免疫反应
• 3.2 细胞免疫反应
• 4 PRRSV的致病机理
• 5 PRRSV的流行病学
• 5.1 PRRSV的发病特点
• 5.2 PRRSV的典型症状及主要病变
• 6 抗体依赖性增强作用对PRRSV感染和复制的影响
• 7 PRRSV与猪“高热病”的关系
• 8 PRRSV的防控技术
• 试验一 HP-PRRSV原始株在抗体压下传代突变株抗原性及致病力变化研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 主要试剂
• 1.2 HP-PRRSV原始毒株-SD0612
• 1.3 SD0612在抗体压下的传代毒株
• 1.4 传代毒株回归实验动物
• 1.5 接毒猪的临床症状观察及血常规变化检测
• 1.6 接毒猪不同时期ELISA抗体检测
• 1.7 接种毒株后实验猪剖检病变及病理组织学变化观察
• 2 结果
• 2.1 接毒猪临床表现
• 2.2 接毒猪血常规变化
• 2.3 接毒猪PRRSV抗体变化规律
• 2.4 接毒猪的剖检病变
• 2.5 接毒猪病理组织学变化
• 2.5.1 SD0612接种组
• 2.5.2 F40接种组
• 2.5.3 E40接种组
• 2.5.4 A40接种组
• 2.5.5 对照组
• 3 讨论
• 试验二 SD0612原始株在抗体压下传代突变株对HP-PRRSV的免疫保护作用的研究
• 1. 材料与方法
• 1.1 病毒
• 1.2 主要试剂
• 1.3 实验动物及处理
• 1.4 强毒攻击后不同时期PRRSV抗体的测定
• 1.5 接种突变株后HP-PRRSV强毒攻击后的临床表现及病理变化
• 2 结果
• 2.1 不同毒株接种猪强毒攻毒后PRRSV抗体变化
• 2.2 不同毒株接种猪强毒攻击后的临床表现
• 2.3 不同毒株接种猪强毒株攻毒后的病理变化
• 2.3.1 F40接种组
• 2.3.2 A40接种组
• 2.3.3 E40接种组
• 2.3.4 对照组
• 3 讨论
• 参考文献
• 致谢