新疆加工番茄顶端黄化病因分析及马铃薯M病毒的鉴定

论文摘要

2009-2010年间对新疆石河子、玛纳斯县、呼图壁县、吉木萨尔县、和硕县等15个加工番茄主产区进行了深入调查,发现田间番茄除了表现花叶、蕨叶等常见病毒病症状外,还有一些植株表现为顶端全部黄化,而中下部叶片表现正常,与普通黄化症状不一致,田间呈随机分布状,发病率在2%-50%之间,不同地区的发病率和发病程度有一定差异。发病率与品种、栽培方式以及灌水方式没有明显的关系。通过ICP-AES法对加工番茄顶端黄化样品9种元素含量进行测定,结果显示：顶端黄化植株中Mg、Mn元素的含量稍微低于正常植株,而B、K、Mo、Na、Zn的含量则明显高于同一地块的正常植株,Fe、Ca元素的含量在黄化植株中和正常植株中则没有明显差异。基本明确了加工番茄顶端黄化并非由生理性缺素引起。通过对田间样品病毒粒子粗提液的电镜观察,发现有多种病毒粒子存在。间接酶联免疫吸附法对30个田间样品进行检测的结果表明CMV的检测率为100%,TMV、ToMV、BBWV的检测率分别为66.7%、96.7%、70.0%。运用TMV、ToMV、CMV、PVS、PVM等特异性引物对加工番茄顶端黄化样品进行RT-PCR扩增,得到了相应的目标条带,这与ELISA检测结果基本一致,加工番茄顶端黄化样品中有多种病毒存在。初步认为加工番茄顶端黄化可能与这些病毒有一定关系,但病因仍不清楚。将PVM特异性引物PVMR/F扩增出的目标片段进行克隆并测序,经过与GENEBANK中其他已报道的PVM部分序列比对,结果显示：RT-PCR扩增出的目标条带是PVM的一段基因,有1198个核苷酸组成,包含完整的PVMCP基因（记为PVM-XJ）。与基因库中的其他代表分离物相比,核苷酸序列与中国杭州（AJ437481）、美国（AF023877）、波兰（AY311394）、伊朗（EF397743）、拉脱维亚（GQ496609）、俄国（NC001361）、德国（X57440）、意大利（X85114）以及加拿大（EF063383、EF063384、EF063387）地区分离物的同源性为74.0%-95.8%。PVM-XJ与俄国的登录号为NC001361的亲缘关系最近,与加拿大的EF063387关系最远。首次在加工番茄上用分子检测方法鉴定到了PVM。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 前言
• 第一章 文献综述
• 1.1 新疆加工番茄病毒病田间症状及病毒种类
• 1.2 植物黄化成因及影响的研究
• 1.2.1 植物生理性病害引起黄化
• 1.2.2 植原体引起黄化
• 1.2.3 植物病毒引起黄化
• 1.2.4 类病毒引起黄化
• 1.3 植物样品元素含量的测定方法
• 1.4 加工番茄上五种病毒的的研究概况
• 1.4.1 烟草花叶病毒（TMV）的研究
• 1.4.2 番茄花叶病毒（ToMV）的研究
• 1.4.3 黄瓜花叶病毒（CMV）的研究
• 1.4.4 马铃薯S病毒（PVS）的研究
• 1.4.5 马铃薯M病毒（PVM）的研究
• 1.5 加工番茄病毒病害的检测方法
• 1.5.1 生物学检测方法
• 1.5.2 电子显微镜检测法
• 1.5.3 酶联免疫吸附法（ELISA）
• 1.5.4 分子生物学方法
• 第二章 加工番茄顶端黄化的发生及田间调查
• 2.1 加工番茄顶端黄化田间调查
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 加工番茄顶端黄化发生时间
• 2.2.2 加工番茄顶端黄化症状特点及田间分布
• 2.2.3 田间加工番茄顶端黄化发病率的调查
• 2.2.4 加工番茄顶端黄化与品种和栽培方式间的关系
• 第三章 加工番茄顶端黄化病因的初步研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 材料
• 3.1.2 方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 样品中九种元素含量测定
• 3.2.2 病毒的提纯及电镜观察
• 3.2.3 间接酶联免疫吸附法测定田间样品
• 3.2.4 田间样品RT-PCR检测
• 第四章 PVM CP的克隆及序列分析
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 材料
• 4.1.2 方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 菌落PCR鉴定
• 4.2.2 质粒HindⅢ和XbaⅠ酶切鉴定
• 4.2.3 PVM CP的序列测定及分析
• 第五章 结论与讨论
• 5.1 新疆加工番茄顶端黄化病因尚不明确
• 5.2 首次在新疆加工番茄上用分子检测方法鉴定出PVM
• 5.3 加工番茄体内存在多种病毒,但与所致症状类型没有明显相关性
• 参考文献
• 附录1 常用缓冲液及培养基配方
• 附录2 主要符号表
• 致谢
• 作者简介
• 导师评阅表