米曲霉菌株的诱变选育及其制剂的应用研究

论文摘要

以米曲霉3.4383作为原始菌株,经紫外、EMS复合诱变,通过培养筛选,得到一株高产蛋白酶和纤维素酶的变异菌株UV-2’。其蛋白酶和纤维素酶活比原始菌株（蛋白酶2526U/g,纤维素酶987U/g）提高到3250U/g和1145U/g,传代培养20代,菌株遗传稳定性好。确定复合诱变条件为:紫外线照射用30W紫外灯,距离为28cm,照射时间为60s,EMS浓度为0.8%。复合诱变之后,从中筛选出一株蛋白酶活力高的菌株UV-2’,其蛋白酶活和纤维素酶活较出发菌株分别提高29%和16%。研究发酵培养条件对菌株产酶影响中发现:碳氮源、活性剂、培养基的料水比对菌株产酶都有影响;发酵温度、发酵时间、pH、无机盐等对菌株产酶也有影响。通过单因素试验确定的培养条件为:吐温-80含量0.24%,料水比为5/3,pH7.5,在40℃下,发酵84h,酶活可达3250U/g和1145U/g干曲。探索出了FeSO4能强烈抑制菌株产酶,加入KNO3菌株产酶大大提高;并进一步研究了不同氮源和碳源对米曲霉UV-2’产蛋白酶和纤维素酶的影响。确定了饲料酶制剂生产中最佳的氮源和碳源分别为豆粕和麸皮,进一步研究了发酵培养基中麸皮:豆粕=1:5。最后以上述各单因素试验结果做参照,设计正交试验来确定综合因素对菌株产酶的影响,通过正交试验结果可知,发酵培养物的最适合条件为:培养基在豆粕含量60%,麸皮含量10%,添加0.2%的KNO3,吐温-80含量在0.24%,料水比在5/3,pH7.5时产蛋白酶可达4572U/g、纤维素酶可达1923 U/g。选择1日龄商品代AA肉鸡,研究分别在玉米-豆粕型和玉米-小麦-豆粕型日粮中添加粗酶制剂对肉鸡生产性能、肠道菌群及免疫器官发育的影响。结果表明,添加粗酶制剂显著降低了肉鸡的料肉比（P < 0.05）,有提高肉鸡1-42日龄日增重和出栏体重的趋势（P < 0.10）;促进了肉鸡免疫器官发育提高了免疫功能,并能够促进肉鸡肠道中乳酸杆菌的增殖,减少肠道大肠杆菌的数量,从而在一定程度上改善肉鸡的肠道微生态环境;在玉米-小麦-豆粕型日粮中添加粗酶制剂可以显著降低肉鸡食糜的黏度（P < 0.05）;添加粗酶制剂显著提高了肉鸡食糜中蛋白酶活（P < 0.05）,并有提高粗蛋白回肠表观消化率的趋势（P < 0.10）,对肉鸡食糜中淀粉酶活和淀粉的回肠表观消化率影响不显著（P > 0.05）。本研究结果揭示,添加粗酶制剂可以改善肉鸡的生产性能。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 1. 米曲霉的生物学特征
• 2. 米曲霉在工业上的应用
• 3. 蛋白酶的性质及其应用
• 4. 纤维素酶的性质及其应用
• 5. 紫外线、EMS 的诱变原理和机制
• 实验研究
• 试验一 米曲霉高产蛋白酶和纤维素酶菌株的诱变选育
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果与分析
• 4 讨论
• 试验二 米曲霉发酵条件的优化研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果与分析
• 4 讨论
• 试验三 米曲霉发酵粗酶制剂对肉鸡生产性能的影响
• 1 材料和方法
• 2 结果与分析
• 3 讨论
• 结论
• 附图
• 参考文献
• 就读硕士期间发表的主要论文
• 致谢