归术益坤汤治疗多囊卵巢综合征的临床与实验研究

论文摘要

多囊卵巢综合征（polycystic ovary syndrome,PCOS）又称为Stein-Leventhal综合征,是以发病多因性、临床症状呈多态性为主要特征的一种内分泌综合征。其病因复杂,涉及范围广泛,至今病因尚不明确,一直以来是国内外众多学者努力完善的课题之一。其典型的临床表现为卵巢多囊性改变、高雄激素血症和黄体生成素（LH）/促卵泡激素（FSH）比值增高,不同程度的月经异常（月经稀发、量少、闭经、功能失调性子宫出血）、不孕、多毛、痤疮、肥胖等,并常伴有胰岛素抵抗或高胰岛素血症和高脂血症。根据其症状,中医学可归于“闭经”、“崩漏”“癥瘕”的病症范畴,古代医家和现代中医学者辨证论治,收到了很好的疗效,显示了中医药在治疗PCOS领域中的巨大潜力。因此,探寻PCOS的病因病机和有效治疗方法,是当前临床研究的重大课题,具有重要社会意义和临床价值。本研究从临床和实验两方面探索PCOS的治疗规律和作用机制,为中医药治疗PCOS贡献力量。1临床研究1.1 PCOS患者舌象的研究1.1.1目的：从中医四诊中最有特色及客观化的舌诊角度探讨PCOS的中医证候规律性,探讨PCOS舌象特征与数字化舌图的运用。1.1.2方法：利用数码相机拍摄101例PCOS患者的舌象照片,通过图像统一化处理,运用统计学方法,对舌象的颜色、形态、舌苔等多方面进行分析,总结规律。1.1.3结果：舌色可分为3类：淡紫舌占34.65%,淡舌占45.54%,紫红舌占19.80%；胖大舌、齿痕舌、嫩舌出现的比例高,且常合并出现,舌苔以腻苔和滑苔多见。1.1.4结论：临床所见PCOS患者以脾肾不足多见,可同时出现血瘀、痰湿的病理产物。1.2归术益坤汤治疗脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的疗效观察1.2.1目的：探索临床常见的脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的有效治疗方法。1.2.2方法：通过对比用药前后妊娠率、临床症状评分、BMI指数、激素水平、B超等方面,评价有补肾健脾、养血通利作用的归术益坤汤治疗脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的疗效。1.2.3结果：归术益坤汤在对改善PCOS患者临床症状、高雄激素水平、卵巢增大等方面,疗效极为显著。就PCOS最典型的月经后错或闭经、月经量少、肥胖、痤疮、多毛等症状而言,治疗6个月后症状均明显改善。治疗6个月内妊娠率为10.2%,治疗12个月内妊娠率为37.5%。1.2.4结论：归术益坤汤能够有效改善脾肾不足、湿浊结聚型PCOS患者的临床症状和实验室指标,促进排卵,提高妊娠率。2实验研究2.1归术益坤汤对PCOS大鼠血清激素水平和组织学的影响2.1.1目的：通过动物实验,从血清激素和卵巢组织学方面检验归术益坤汤治疗PCOS的疗效。2.1.2方法：利用来曲唑诱导建立PCOS大鼠动物模型,灌服归术益坤汤给予治疗,以氯米芬为阳性对照组,检测大鼠用药后正常对照组、模型对照组、阳性对照组、中药组之间激素水平、卵巢结构的变化。2.1.3结果：模型组大鼠血清睾酮（T）的含量明显升高,与正常组、中药组、阳性药组之间均有显著差异（P<0.05）,正常组、中药组、阳性药组之间均无组间差异（P>0.05）。模型组的促黄体生成素（LH）水平与阳性药组相比有显著差异（P<0.05）,其他各组间差异不明显。而各组间雌二醇（E2）与促卵泡生成素（FSH）之间的差异不明显。模型组大鼠卵泡多数成囊性扩张,可见囊性窦卵泡,颗粒细胞层数减少,黄体组织数量减少。中药组卵巢可见少许囊性窦卵泡的出现,可见成熟卵泡,颗粒细胞数较模型组明显增加,为多层,可见黄体。氯米芬阳性药组亦可见部分囊性窦卵泡,颗粒细胞为多层,排列比较整齐,黄体组织较少。2.1.4结论：归术益坤汤能够有效改善大鼠内分泌,可恢复卵巢卵泡结构,使颗粒细胞增殖,促进卵泡发育。2.2归术益坤汤对PCOS大鼠颗粒细胞自噬的影响2.2.1目的：通过观察归术益坤汤对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞自噬发生的影响,发现PCOS颗粒细胞减少的新机制,探索中药治疗PCOS的相关作用机制。2.2.2方法：实验利用来曲唑诱导建立PCOS大鼠动物模型,灌服归术益坤汤给予治疗,以氯米芬为阳性对照组,用药后提取大鼠卵巢颗粒细胞,应用MDC荧光染色及流式细胞术测定鼠颗粒细胞自噬率。采用western blot方法测定各组动物颗粒细胞中自噬特异性标志LC3和自噬相关蛋白Bclin-1的表达,验证各组间自噬发生的差异。2.2.3结果：MDC荧光染色后荧光强度测定：模型组>阳性药组>中药组>正常组。组间两两比较,模型组与正常组、中药组、阳性药组之间均存在显著性差异（P<0.05）,而正常组、中药组、阳性药组无组间差异。正常对照组LC3Ⅰ和Ⅱ、Bclin-1蛋白的表达量均较低,PCOS模型组的LC3、Bclin-1呈现高表达（与正常组比较P<0.01）。经中药作用后可见LC3、Bclin-1平呈明显降低趋势（与模型组比较P<0.05）,但仍高于阳性药组。2.2.4结论：PCOS模型大鼠的卵巢颗粒细胞确实存在有自噬高发的现象,与PCOS颗粒细胞减少相关。归术益坤汤可以显著降低细胞自噬的发生,有效保护了颗粒细胞,从而对卵巢功能起到了维护作用。2.3归术益坤汤对PCOS大鼠颗粒细胞自噬PI3k/Akt通路的调节作用2.3.1目的：通过检测归术益坤汤对PCOS大鼠卵巢颗粒细胞PI3K、AKT和mTOR的磷酸化蛋白表达水平的影响,对中药干预PCOS卵巢颗粒细胞自噬的信号转导通路加以研究。2.3.2方法：实验利用来曲唑诱导建立PCOS大鼠动物模型,将动物灌服归术益坤汤给予疗,以氯米芬为阳性对照组,用药后取各组实验大鼠卵巢颗粒细胞,提取蛋白后进行蛋白定量,采用western blot方法测定PI3K、Akt、mTOR的蛋白表达。2.3.3结果：模型组PI3K、Akt、mTOR的表达均明显降低,中药与阳性药干预后PI3K、AktmTOR表达明显提高。2.3.4结论：归术益坤汤可有效调节PI3K的活性,提高其蛋白表达量,从而影响mTOR的表达,对自噬发挥了负向调控的作用。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 缩略词
• 前言
• 第一部分 文献综述
• 综述一 多囊卵巢综合征的中医研究概况
• 1 多囊卵巢综合征的中医病因病机
• 1.1 古代医家对多囊卵巢综合征病因病机的认识
• 1.2 现代医家对多囊卵巢综合征病因病机的认识
• 2 多囊卵巢综合征的中医药治疗
• 2.1 辨证分型治疗
• 2.2 专方专药治疗
• 2.3 中药周期治疗
• 2.4 针灸治疗
• 参考文献
• 综述二 多囊卵巢综合征的西医研究概况
• 1 多囊卵巢综合征的病因研究
• 1.1 遗传因素
• 1.2 内分泌及代谢因素
• 1.3 精神心理因素
• 2 多囊卵巢综合征的诊断
• 3 多囊卵巢综合征的西医药治疗
• 3.1 一般治疗
• 3.2 药物治疗
• 3.3 手术治疗
• 3.4 辅助生殖技术
• 参考文献
• 综述三 多囊卵巢综合征的实验研究概况
• 1 动物模型制作
• 1.1 孕酮硅胶棒联合低剂量HCG造模法
• 1.2 来曲唑造模法
• 1.3 DHEA造模法
• 2 西医实验研
• 2.1 高雄激素血症
• 2.2 高胰岛素和胰岛素血症
• 2.3 脂代谢实验研究
• 2.4 颗粒细胞实验研究
• 2.5 子宫内膜实验研究
• 2.6 其他方面实验研究
• 3 中医实验研究
• 4 总结
• 参考文献
• 第二部分 临床研究
• 前言
• 研究一 Pocs患者舌象的研究
• 临床资料
• 1 病例选择
• 1.1 诊断标准
• 1.2 纳入标准
• 1.3 排除标准
• 2 研究方法
• 2.1 舌象的采集
• 2.2 舌色数据的提取和计算方法
• 2.3 舌体、舌质、舌苔的统计
• 结果
• 1 PCOS患者舌色特点
• 2 PCOS舌形、舌苔的特点
• 2.1 舌形分布情况
• 2.2 舌苔分布情况
• 讨论
• 参考文献
• 研究二 归术益坤汤治疗脾肾不足、湿浊结聚型PCOS的疗效观察
• 临床资料
• 1 病例选择
• 1.1 诊断标准
• 1.2 纳入标准
• 1.3 排除标准
• 2 研究方法
• 结果
• 1 入选病例基本情况
• 1.1 年龄
• 1.2 病程
• 2 治疗前后结果比较
• 2.1 妊娠率
• 2.2 治疗前后BMI评分变化
• 2.3 治疗前后中医证候评分变化
• 2.4 治疗前后激素水平变化
• 2.5 治疗前后子宫、卵巢大小的变化
• 讨论
• 参考文献
• 第三部分 实验研究
• 前言
• 实验一 归术益坤汤对PCOS大鼠血清激素水平和组织学的影响
• 材料和方法
• 1 材料
• 1.1 动物
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 2 方法
• 2.1 模型的建立及动物分组
• 2.2 血清学鉴定
• 2.3 大鼠卵巢形态学检测
• 结果
• 1 各组大鼠体重的变化
• 2 各组大鼠性激素水平的变化
• 3 各组大鼠卵巢形态学的变化
• 讨论
• 参考文献
• 实验二 归术益坤汤对PCOS大鼠颗粒细胞自噬率的影响
• 材料和方法
• 1 材料
• 1.1 动物
• 1.2 试剂
• 1.3 仪器
• 2 方法
• 2.1 模型的建立及动物分组
• 2.2 大鼠颗粒细胞自噬率的检测
• 2.3 大鼠颗粒细胞自噬特异性标志LC3表达的检测
• 2.4 大鼠颗粒细胞自噬相关蛋白Bclin-1表达的检测
• 2.5 统计学方法
• 结果
• 1 归术益坤汤对各组大鼠的卵巢颗粒细胞自噬率的影响
• 2 归术益坤汤对大鼠颗粒细胞自噬特异性标志LC3表达的影响
• 3 归术益坤汤对大鼠颗粒细胞自噬相关蛋白Bclin-1表达的影响
• 讨论
• 参考文献
• 实验三 归术益坤汤对PCOS大鼠颗粒细胞自噬PI3K/Akt通路的调节作用
• 材料与方法
• 1 材料
• 1.1 实验材料
• 1.2 实验仪器
• 2 方法
• 2.1 提取蛋白
• 2.2 蛋白定量
• 2.3 分离电泳
• 2.4 电转
• 2.5 封闭
• 2.6 一抗孵育
• 2.7 二抗孵育
• 2.8 曝光成像
• 2.9 图像分析
• 3 统计学方法
• 结果
• 1 归术益坤汤对PCOS大鼠颗粒细胞PI3K蛋白表达的影响
• 2 归术益坤汤对大鼠颗粒细胞Akt蛋白表达的影响
• 3 归术益坤汤对大鼠颗粒细胞mTOR蛋白表达的影响
• 讨论
• 参考文献
• 附录1 PCOS典型舌图
• 附录2 疗效观察表
• 致谢
• 个人简历