论文摘要
目的：研究脂肪细胞因子脂联素（APN）对高糖诱导血管内皮细胞凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）表达的影响及其机制，为2型糖尿病患者大血管病变的预防和治疗提供理论依据。方法：（1）不同浓度D-葡萄糖（0、15、30、60mmol/L）作用于人脐静脉内皮细胞株（HUVEC-12）48h后，倒置相差显微镜观察内皮细胞形态，Western Blotting检测HUVEC-12中LOX-1的蛋白表达，筛选最佳葡萄糖浓度用于构建高糖诱导的内皮细胞受损模型。（2）用浓度30mmol/LD-葡萄糖作用于HUVEC-12不同时间（0、12、24、48、72h）后，倒置相差显微镜观察内皮细胞形态，Western Blotting检测HUVEC-12中LOX-1的蛋白表达，筛选最佳葡萄糖作用时间用于建模。（3）选取30mmol/L D-葡萄糖作用于HUVEC-1248h，造成D-葡萄糖诱导的HUVEC-12内皮功能受损模型；然后，不同浓度的APN（0、10、20、40μg/m l）作用于D-葡萄糖诱导的HUVEC-1248h，倒置相差显微镜观察内皮细胞形态，Western Blotting检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（p-ERK1/2）、核转录因子（NF）－κB和LOX-1蛋白表达，同时，筛选最佳保护作用的APN浓度。（4）选取20μg/m l APN作用于D-葡萄糖诱导的HUVEC-12不同时间（0、12、24、48、72h）后，倒置相差显微镜观察内皮细胞形态，Western Blotting检测HUVEC-12中p-ERK1/2、NF－κB和LOX-1蛋白表达。同时，筛选最佳保护作用的APN作用时间。（5）在20μg/ml APN作用48h后的D-葡萄糖诱导的HUVEC-12中使用ERK1/2阻断剂PD98059（50umol/l）干预，用Western Blotting检测HUVEC-12中p-ERK1/2、NF－κB和LOX-1蛋白表达,用间接免疫荧光法检测其核转录因子－κB亚基p65（NF－κB-p65）核转位情况。结果：（1）不同浓度的D-葡萄糖诱导HUVEC-12不同时间，镜下见内皮细胞排列较为紊乱,折光性变弱，细胞核模糊，细胞间隙明显增大，细胞内颗粒状物增多；D-葡萄糖诱导的HUVEC-12中LOX-1蛋白表达均上调，其中，30mmol/L D-葡萄糖作用于HUVEC-1248h，内皮细胞形态改变和LOX-1蛋白表达上调最明显。（2）不同浓度APN作用于D-葡萄糖诱导的HUVEC-12不同时间，镜下见内皮细胞形态改善，折光性有所增强，胞内颗粒物减少，细胞排列相对规整；同时，APN可使D-葡萄糖诱导的HUVEC-12内LOX-1蛋白表达下调，NF－κB表达降低，ERK1/2磷酸化水平增强；其中20μg/ml APN作用于D-葡萄糖诱导的HUVEC-1248h后，作用最明显。（3）ERK阻断剂PD98059和APN联合干预下的D-葡萄糖诱导的HUVEC-12中ERK信号通路受抑制，LOX-1蛋白表达上调， NF－κB-p65蛋白表达增多，并向细胞核内转移增多，出现核移位。结论：1．高糖可诱使HUVEC-12形态出现受损性改变，并可诱使HUVEC-12的LOX-1蛋白表达上调。2． APN可能通过激活ERK1/2信号通路，引起NF－κB蛋白表达下调，从而引起D-葡萄糖诱导的HUVEC-12中LOX-1蛋白表达下调，发挥其保护血管内皮细胞的作用。
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