猪β-防御素-2多克隆抗体的制备及其检测

论文摘要

防御素是动物机体自身分泌的用来抵御外界病原微生物的一类重要的抗菌肽物质,它在动物的先天免疫中发挥着十分重要的作用。猪p-防御素2（pBD-2）是猪源抗菌肽中较为重要的一种,它主要来源于上皮组织中,广泛存在于皮肤、舌、呼吸道、脾、胸腺、胃肠道、肝脏等器官的组织细胞中,其中肝脏组织中含量最高。因其具有独特的抗菌机制、广泛的抗菌谱以及不宜产生耐药性等众多优点,近些年来已成为研究的热门。目前市场上还没有商品化的抗猪p-防御素2单克隆抗体或多克隆抗体,为了建立检测猪p-防御素2在猪体内的表达及其研究需要,本实验制备了猪p-防御素2的多克隆抗体并对其进行了检测。本研究利用实验室的工程菌诱导并纯化目的蛋白,经四次免疫兔子后采集血清,经ELISA检测,证明抗体效价可达1：12800。纯化抗体后,经ELISA测定,其效价高达1：204800以上。Western blotting结果显示猪p-防御素2多克隆抗体与猪p-防御素2蛋白特异性结合,为后续实验奠定了基础。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• 1 文献综述
• 1.1 抗菌肽的来源与分类
• 1.2 抗菌肽的生物学活性
• 1.2.1 抗菌肽的广谱抗菌作用
• 1.2.2 抗菌肽对病毒的作用
• 1.2.3 抗菌肽对原虫的作用
• 1.2.4 抗菌肽对癌细胞的作用
• 1.2.5 抗菌肽的其他作用
• 1.3 抗菌肽的作用机制
• 1.4 猪β-防御素的研究进展和发展前景
• 2 引言
• 3 材料与方法
• 3.1 实验材料
• 3.1.1 实验菌种与实验动物
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要仪器设备
• 3.2 主要溶液及其配制
• 3.2.1 细菌培养基溶液
• 3.2.2 蛋白诱导相关试剂
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 多克隆抗体的制备
• 3.3.1.1 目的蛋白的诱导表达
• 3.3.1.2 目的蛋白的提取和纯化
• 3.3.1.3 透析袋的处理
• 3.3.1.4 Ni+亲和层析柱的再生
• 3.3.1.5 目的蛋白SDS-PAGE鉴定
• 3.3.1.6 多克隆抗体的制备
• 3.3.2 多克隆抗体的纯化
• 3.3.2.1 抗体纯化相关溶液配制
• 3.3.2.2 抗体纯化方法
• 3.3.3 多克隆抗体的ELISA检测
• 3.3.3.1 ELISA相关溶液
• 3.3.3.2 多克隆抗体的Elisa检测方法
• 3.3.4 Western印迹检测
• 3.3.4.1 Western印迹相关溶液
• 3.3.4.2 Western blot测定
• 4 实验结果与分析
• 4.1 目的蛋白的诱导表达及纯化
• 4.2 兔血清ELISA检测
• 4.2.1 最佳抗原包被浓度的确定
• 4.2.2 抗体效价的检测
• 4.3 兔血清的收集
• 4.4 兔血清的纯化
• 4.5 纯化抗体效价检测
• 4.6 抗体的Western blot检测
• 5 讨论与结论
• 5.1 讨论
• 5.2 结论
• 参考文献
• ABSTRACT