论文摘要
目的:了解转录因子Sp1、骨桥蛋白OPN在不同转移潜能的人大肠癌细胞株中的表达,利用Sp1特异性抑制剂Mithramycin A（MIT）,观察OPN表达的变化及对大肠癌细胞生长的影响,研究二者在大肠癌侵袭转移中的作用,为探讨Sp1能否成为大肠癌治疗的有效靶点初步建立实验基础。方法:以体外建系的大肠癌细胞株SW480、SW620为研究对象,通过Real-time PCR、Western-blot、细胞免疫荧光化学染色方法从mRNA和蛋白水平分别检测Sp1、OPN的表达;检测Mithramycin A对大肠癌细胞Spl、OPN表达的影响;细胞生长曲线检测肿瘤细胞在Sp1有无干扰时的增殖变化;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;明胶酶谱实验分析MMPs在Sp1有无干扰时的变化。结果:Real-time PCR的结果提示SW480（Duke’s B期）、SW620（Duke’s C期）两株细胞株都表达Sp1mRNA、OPNmRNA,Western-blot检测Sp1、OPN蛋白在两种大肠癌细胞株中均有表达,SW620细胞株Sp1、OPN表达水平高于SW480（P<0.05）;两株细胞（SW480和SW620）的OPN、Sp1基因转录水平及蛋白表达水平在Mithramycin A 0.10μM剂量组均比对照组低（P<0.05）;细胞生长曲线测定结果提示Sp1被干扰后,SW480、SW620细胞的增殖能力明显减弱,细胞划痕实验显示两株大肠癌细胞的运动侵袭能力都下降（P<0.05）,明胶酶谱实验显示,Sp1被干扰后,SW480、SW620细胞分泌MMPs的能力下降。结论:Sp1、OPN在大肠癌细胞株SW480、SW620中均有表达,与大肠癌肿瘤分期、侵袭转移相关,Sp1特异性抑制剂Mithramycin A可下调OPN及其下游因子MMPs的表达, SW480、SW620细胞株侵袭转移过程中可能存在Sp1-OPN-MMPs通路,针对Sp1可能是治疗大肠癌侵袭转移的一种新的潜在靶点。