表达狂犬病病毒糖蛋白的重组伪狂犬病病毒的构建及免疫试验研究

论文摘要

为了研制一种新型的抗狂犬病疫苗,本研究通过同源重组的方法成功的构建了表达狂犬病病毒糖蛋白膜外区的两株重组伪狂犬病病毒rPrV/eGFP/rgp、rPrV/rgp),并对获得的重组病毒进行了犬科动物的免疫试验。本研究首先对PrV疫苗株Bartha-K61在犬科动物体内的安全性和有效性进行了评价。结果显示:该疫苗株在犬科动物体内安全,且能有效的刺激机体产生免疫应答。通过在Bartha-K61的PK基因处分别插入eGFP/rgp和rgp两个表达盒,构建了表达RV糖蛋白的两株重组病毒。犬的免疫试验结果表明:肌肉注射和口服免疫5周时,均能刺激机体产生抗体滴度大于0.5 IU/mL具有保护水平的抗RV的中和抗体,针对PrV的中和抗体滴度在1:64～1:128之间,且均可维持在26周以上。表明,两个重组病毒均可有效的刺激机体产生抗RV的保护性免疫应答。

论文目录

• 内容提要
• 引言
• 第一篇 文献综述
• 第一章 狂犬病病毒分子生物学及其疫苗的研究进展
• 第二章 伪狂犬病病毒及其活载体疫苗的研究进展
• 第二篇 研究内容
• 第一章 伪狂犬病疫苗株 Bartha-K61 在犬体内的安全性评价及免疫实验研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 Bartha-K61 在试验犬体内的组织病理学检测
• 2.2 Bartha-K61 在试验犬体内的免疫组化检测
• 2.3 Bartha-K61 在试验犬排泄物中是否存在及存留时间检测
• 2.4 Bartha-K61 免疫犬后的临床观察
• 2.5 T 淋巴细胞增殖试验
• 2.6 犬血清Bartha-K61 特异性抗体水平的测定
• 2.7 犬血清中Bartha-K61 中和抗体的检测
• 2.8 Bartha-K61 免疫犬后的生产性能检测
• 2.9 Bartha-K61 免疫犬后血液指标的检测
• 3 讨论
• 4 小结
• 第二章 表达LacZ 基因的重组伪狂犬病病毒的构建
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 PrV 基因组的提取
• 2.2 p8AA-LacZ 中间转移载体的酶切鉴定
• 2.3 rPrV/LacZ 重组病毒的获得
• 2.4 LacZ 基因在重组病毒中的整合性及稳定性鉴定
• 2.5 重组病毒外源蛋白基因mRNA 转录的检测
• 2.6 目的基因的Western blot 检测
• 3 讨论
• 4 小结
• 第三章 rPrV/eGFP/rgp 和 rPrV/rgp 重组病毒的构建及生物学特性研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 p8AA-eGFP/rgp、p8AA-rgp 中间转移载体的酶切鉴定
• 2.2 重组病毒rPrV/eGFP/rgp 的获得及鉴定
• 2.3 重组病毒rPrV/rgp 的获得及鉴定
• 2.4 重组病毒连续传代的遗传稳定性鉴定
• 2.5 重组病毒的增殖特性鉴定
• 3 讨论
• 4 小结
• 第四章 狂犬病病毒糖蛋白重组伪狂犬病病毒的免疫试验研究
• 1 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 方法
• 2 结果
• 2.1 血清中抗体的Western blot 检测
• 2.2 免疫犬血清中RV 特异性抗体的测定
• 2.3 免疫犬外周血淋巴细胞增殖试验
• 2.4 小鼠中和试验
• 2.5 血清中和抗体效价的测定
• 3 讨论
• 4 小结
• 结论
• 参考文献
• 攻博期间发表的学术论文及其他成果
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢
• 导师简介
• 作者简介
• CURRICULUM VITAE