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TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽上皮细胞间隙连接与鼻咽上皮细胞癌变的相关性及益气解毒方的干预效应

2020-12-11阅读(907)

TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽上皮细胞间隙连接与鼻咽上皮细胞癌变的相关性及益气解毒方的干预效应

论文摘要

本研究分二部分完成。第一部分TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞间隙连接结构特征及其与鼻咽黏膜上皮细胞癌前病变的关系目的：明确TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽上皮细胞癌变与细胞间隙连接通讯的关系。方法：G10代模型鼠按12、15、18月龄随机分为3组,每组各12只。每组另设同品系健康野生小鼠为对照组,每组12只。观察不同月龄转基因小鼠鼻咽黏膜上皮细胞超微病理学特征与细胞间隙连接变化;用免疫组化、Western-blot法、RT-PCR技术检测Cx43、Cx32、Cx26及其mRNA的表达水平；并对各蛋白表达水平进行相关性分析。结果：TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞异型性改变随月龄增加而呈现加重趋势；细胞核、线粒体形态发生改变,细胞间隙增宽,细胞连接明显减少或缺失,连接长度缩短,对照组无相应改变。各月龄转基因小鼠鼻咽黏膜Cx43、Cx32、Cx26及其mRNA表达水平随月龄增长而呈现下降趋势。其中15月、18月龄转基因小鼠鼻咽上皮细胞Cx43、Cx32、Cx26蛋白表达水平明显低于12月龄转基因小鼠,差异有统计学意义（P值均小于0.05）；15月龄、18月龄小鼠鼻咽上皮细胞Cx43、Cx32、Cx26蛋白表达水平无显著性差异（P>0.05）。各月龄转基因小鼠鼻咽黏膜上皮细胞Cx43、Cx32、Cx26及其mRNA表达水平均低于同月龄野生小鼠,差异均有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。对各月龄转基因鼠Cx43、Cx32、Cx26表达水平关联性进行分析,发现Cx43-Cx32、Cx43-Cx26、Cx32-Cx26呈正相关（P<0.05）。结论：TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞异型性改变随时间增长而加重,细胞间隙增宽,细胞连接明显减少或缺失,连接长度缩短可能与Cx43、Cx32、Cx26及其mRNA表达水平下降,细胞间隙连接通讯功能障碍有关。第二部分益气解毒方对TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞间隙连接通讯的干预效应及其对鼻咽黏膜上皮细胞癌前病变发展过程的影响目的：研究益气解毒方对TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞间隙连接通讯的干预效应及其对鼻咽上皮细胞癌变过程的影响。方法：模型鼠72只随机分为3组,模型组[（modeling group, MG）,每天灌胃生理盐水0.2ml]、益气解毒方干预组[（Qi-boosting toxin-resolving intervening group, QG）,每天灌胃益气解毒方剂0.2ml]、维A酸阳性对照组[（Tretinoin positive controlling group, TG）,每天灌胃维A酸药剂0.2ml]；同品系健康野生鼠24只作阴性对照组（Natural group, NG）,不另加其他干预因素。各组均用诱癌剂二亚硝基哌嗪（N, N’-dinitrosopiperazine, DNP）进行处理,以100mg/kg体重皮下注射,每周2次,共计28次,共处理14周,但不应用促癌剂佛波醇酯(（12-O-tetradecanoylphorbol, TPA）。观察各组小鼠鼻咽黏膜组织病理学、超微病理学特征与细胞间隙连接变化；用免疫组化、Western-blot法、RT-PCR技术检测Cx43、Cx32、Cx26及其mRNA的表达水平。结果：MG组鼻咽黏膜上皮细胞异型性增生明显,有癌变特征,TG组、QG组鼻咽黏膜上皮细胞表现轻度异型增生,NG组部分鼻咽黏膜上皮细胞呈单纯性增生。MG组细胞膜呈伪足样改变,细胞核形态异常,核切迹增多,线粒体肿胀肥大或透明变性,乃至空泡状,细胞间隙增宽,细胞连接明显减少或缺失,连接长度缩短,TG组、NG组、QG组无上述改变。MG组Cx43、Cx32、Cx26及其mRNA表达水平显著低于TG组、NG组、QG组（P<0.05和P<0.01）,而QG组上述蛋白及其mRNA表达量显著高于其在MG组和TG组中的表达水平（P<0.05）。结论：益气解毒方逆转鼻咽黏膜上皮细胞癌前病变的发展,可能通过恢复细胞间隙连接通讯功能,抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡而实现。GJIC已成为肿瘤预防和治疗研究的潜在靶点之一。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 前言
  • 第一部分 TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞间隙连接结构特征及其与鼻咽黏膜上皮细胞癌前病变的关系
  • 1 材料与方法
  • 1.1 主要仪器设备
  • 1.2 实验材料
  • 1.2.1 主要试剂
  • 1.2.2 主要试剂的配制
  • 1.3 实验方法
  • 1.3.1 动物分组
  • 1.3.2 取材
  • 1.3.3 鼻咽黏膜上皮细胞形态学特征观察
  • 1.3.4 鼻咽黏膜上皮中连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26表达活性的免疫组织化学检测
  • 1.3.5 鼻咽黏膜上皮中连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26表达活性的Western-blot验证
  • 1.3.6 鼻咽黏膜上皮连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26 mRNA转录活性的RT-PCR检测
  • 1.3.7 TgN（p53mt-LMPI）/HT转基因模型鼠疮前病变判断
  • 1.4 统计学分析
  • 2 结果
  • 2.1 各组小鼠鼻咽上皮细胞形态学特征
  • 2.1.1 常规病理组织学特征
  • 2.1.2 超微病理学特征与细胞间隙连接变化
  • 2.2 各月龄小鼠鼻咽上皮中连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26表达水平比较
  • 2.2.1 各月龄小鼠鼻咽上皮细胞Cx43、Cx 32、Cx26表达
  • 2.2.2 各月龄转基因小鼠鼻咽上皮细胞连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26表达相关性分析
  • 2.3 各月龄转基因小鼠鼻咽黏膜Cx43、Cx32、Cx26表达Western-blot法验证
  • 2.4 各月龄小鼠鼻咽上皮细胞连接蛋白Cx43、Cx32和Cx26mRNA转录水平比较
  • 2.5 各月龄小鼠鼻咽黏膜上皮细胞间隙连接结构特征与鼻咽黏膜上皮细胞癌前病变的关系
  • 第一部分图片
  • 3 讨论
  • 3.1 TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜形态学特征与细胞间隙连接变化
  • 3.2 各月龄TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠与正常野生鼠连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26表达比较
  • 3.3 DNP对TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽上皮细胞间隙连接特性的影响
  • 3.4 细胞间隙连接通讯与鼻咽癌前病变及鼻咽癌的关系
  • 3.5 小结
  • 第二部分 益气解毒方对TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞间隙连接通讯的干预效应及其对鼻咽上皮细胞癌前病变发展过程的影响
  • 1 材料与方法
  • 1.1 主要仪器设备
  • 1.2 实验材料
  • 1.2.1 主要试剂与药物
  • 1.2.2 实验用药品、主要试剂的配制
  • 1.3 实验方法
  • 1.3.1 动物分组
  • 1.3.2 动物干预
  • 1.3.3 取材
  • 1.3.4 益气解毒方干预后TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞病理组织学观察
  • 1.3.5 益气解毒方干预后TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26表达水平的免疫组织化学检测
  • 1.3.6 益气解毒方干预后TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26‘表达水平的Western-blot法验证
  • 1.3.7 益气解毒方干预后TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26mRNA转录活性的RT-PCR检测
  • 1.4 统计学分析
  • 2 结果
  • 2.1 益气解毒方干预后各组小鼠鼻咽黏膜上皮细胞病理学组织学特征
  • 2.2 益气解毒方干预后各组小鼠鼻咽上皮细胞连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26表达水平比较
  • 2.3 益气解毒方干预后各组小鼠鼻咽上皮细胞连接蛋白Cx43、Cx32和Cx26mRNA的转录活性比较
  • 2.4 益气解毒方干预后小鼠鼻咽上皮细胞间隙连接通讯特征变化与鼻咽黏膜上皮细胞癌前病变的关系
  • 3 讨论
  • 3.1 益气解毒方与肿瘤抑制研究状况
  • 3.2 益气解毒方干预TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜癌前病变的形态学变化及作用机制
  • 3.3 益气解毒方干预对TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞连接蛋白Cx43、Cx32、Cx26表达的影响
  • 3.4 益气解毒方对TgN（p53mt-LMP1）/HT小鼠鼻咽黏膜上皮细胞间隙连接通讯干预效应与鼻咽上皮细胞癌变发展趋势的相关性及其意义
  • 第二部分附图
  • 结论
  • 参考文献
  • 致谢
  • 综述
  • 参考文献
  • 博士期间发表论文、主持研究课题及获得的成果

    • 相关论文文献

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