论文摘要
HPV16 E6/7转基因动物模型的建立 HPV（Human papillomavirus）是乳多空病毒科（Papoviruidae）乳头瘤病毒属中一种重要的致瘤DNA病毒,可引起人生殖道、肛门、口腔、食道等皮肤、粘膜良性和恶性肿瘤,特别是高危型HPV感染和恶性肿瘤发生有关。E6、E7是HPV早期编码区的两个基因,分别编码E6、E7蛋白。这两个蛋白分别与肿瘤抑制蛋白p53和pRb结合,并使之失活,消除了它们抑制细胞生长的功能,增加了细胞进入G1/S期的数量,使细胞分裂加速,形成肿瘤。PINV（Human involucrin promoter）是一种具有皮肤组织特异性的启动子,已被成功地应用于转基因鼠中基因的组织特异性表达研究。 本研究成功地构建了以PINV为启动子、以江苏地区宫颈癌组织中分离、克隆的HPV16E6/7基因为目的基因的真核表达载体pINV/E6/7,重组质粒经不同组织来源的几种细胞转染证实具有一定组织特异性后,酶切线性化并通过显微注射获得了pINg-E6/7转基因首建鼠,繁殖保育后通过PCR检测,阳性后代的比例符合孟德尔遗传定律,证明pINV-E6/7基因可通过生殖器稳定遗传。现已成功地建立了pINV-E6/7转基因鼠系。 在整体动物水平,利用RT-PCR和组织病理切片的方法,分别从mRNA表达和组织病理变化两方面检测了E6/7的表达情况,结果进一步地验证了启动子PINV的组织特异性。 本研究成功地构建了在皮肤组织中特异性表达HPV16E6/7的转基因鼠。旨在通过本研究的工作能为我国HPV16E6/7皮肤肿瘤转基因动物模型的建立、开发及HPV感染性疾病早期诊断方法的建立提供实验前提和基础。 该阳性转基因鼠系的成功建立为本实验室深入研究HPVE6/7致瘤过程中与p53、Rb基因的相关作用,HPVE6/7相关治疗性疫苗的研制提供了实验平台。
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