清火败毒饮调理巨噬细胞高迁移率族蛋白1表达的研究

论文摘要

目的：以烧伤血清及中药清火败毒饮方（Qing Huo Bai Du Yin，QHBDY）血清干预RAW264.7巨噬细胞，观察晚期炎症因子高迁移率族蛋白1（high mobility group box chromosomal protein 1，HMGB1）在RAW264.7巨噬细胞中表达的变化情况，以求了解中药QHBDY抗炎症反应的细胞内源性保护机制。方法：以RAW264.7巨噬细胞为研究对象，通过SD大鼠正常血清、烧伤血清和中药血清干预细胞，应用瑞氏染色观察细胞形态学的变化；四唑盐比色试验（MTT比色试验）了解血清干预后细胞活力的变化；RT-PCR技术了解细胞中HMGB1表达的变化情况。结果：应用5％、10％和20％浓度的正常血清、烧伤血清和中药血清干预RAW264.7细胞，①不同浓度的同类血清对RAW264.7巨噬细胞的活力影响无显著差异，无统计学意义（P＞0.05）；②相同浓度的三种血清均使细胞的活力随着干预时间的延长逐渐减低，且中药血清组活性＞烧伤血清组活性＞正常血清组活性，其影响存在差异（P＜0.05）；③相同时间点用不完全培养基培养的RAW264.7细胞的吸光光度值（OD）低于完全培养基培养的RAW264.7细胞的OD值，两组比较具有差异性（P＜0.05），因此小牛血清可为细胞生长提供营养物质。以20％浓度的正常血清、烧伤血清和中药血清干预RAW264.7细胞，应用RT-PCR技术检测细胞中HMGB1表达的变化，发现①正常RAW264.7巨噬细胞中有少量HMGB1表达；②正常血清干预RAW264.7巨噬细胞后，HMGB1的表达量在正常RAW264.7巨噬细胞HMGB1表达量水平周围波动，在干预后24小时及48小时出现两个小的高峰期，与正常RAW264.7巨噬细胞HMGB1表达量无显著差异，无统计学意义（P＞0.05）；③应用烧伤血清干预的RAW264.7巨噬细胞，其HMGB1的表达量在干预3小时增高后又降为低水平表达，至18小时后急剧增加，于36小时达到高峰（为正常水平的15～20倍），至48小时仍维持高水平表达；④应用中药血清干预RAW264.7巨噬细胞，其HMGB1的表达量在干预3小时增高后又降为低水平表达，于24小时出现缓慢增加，但较烧伤血清干预组低，两组差别具有显著性，有统计学意义（P＜0.05）。结论：①烧伤血清能引起HMGB1在RAW264.7中的高表达，对细胞具有损害作用；②中药血清能降低RAW264.7中HMGB1的表达量，对细胞具有保护作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 前言
• 第一章 实验仪器及所用试剂
• 1.1 实验仪器
• 1.2 实验试剂及耗材
• 第二章 实验设计思路图
• 第三章 实验材料与方法
• 3.1 实验对象
• 3.2 主要试剂的配置
• 3.3 细胞培养实验方法
• 3.4 动物实验方法
• 3.5 RT-PCR实验技术
• 3.6 实验检测技术
• 3.7 结果统计及判定
• 第四章 实验结果
• 4.1 细胞形态
• 4.2 RAW264.7巨噬细胞的生长曲线
• 4.3 血清干预后细胞形态
• 4.4 MTT比色试验
• 4.5 血清干预后 RT-PCR结果
• 第五章 讨论
• 第六章 结论
• 参考文献
• 综述
• 致谢
• 攻读学位期间主要的研究成果