蒙古绵羊β-防御素sBD-1全长cDNA的扩增及组织表达

论文摘要

本文主要研究蒙古绵羊β-防御素-1（sBD-1）。从蒙古绵羊瘤胃黏膜上皮组织中提取总 RNA,采用 RT-PCR 技术扩增出 sBD-1 的 cDNA,将产物测序,得到该 cDNA包含由 192 个碱基组成的开放读码框（ORF）,该 ORF 编码 64 个氨基酸残基的前原防御素,该前原防御素含有β-防御素的特征性结构即六个在特定位置上的保守半胱氨酸残基。我们采用 cDNA 末端快速扩增即 RACE 技术,主要包括锚式 PCR RACE 技术和反向嵌套 PCR RACE 技术分别扩增出蒙古绵羊 sBD-1 的 3ˊ末端和 5ˊ末端,经测序得到 sBD-1 的 cDNA 全长序列。 为了检测 sBD-1 mRNA 在蒙古绵羊体内的可能的表达器官,提取蒙古绵羊的整个消化道、生殖器官,心脏等器官内的总 RNA,通过 RT-PCR 检测 mRNA 的表达。结果显示:sBD-1 mRNA 在整个消化道（除直肠）、气管、脾脏、子宫等管状器官内的黏膜层内有表达,而在实质性器官如心脏、肝脏、肺脏、肾脏、淋巴结、膀胱、卵巢、输卵管中无 sBD-1 mRNA 表达。

论文目录

• 1 引言
• 1.1 防御素分子家族的发现简况
• 1.2 防御素的分类及分布
• 1.2.1 防御素的分类
• 1.2.2 防御素的分布
• 1.3 防御素的分子结构及特征
• 1.3.1 α-防御素
• 1.3.2 β-防御素
• 1.3.3 θ-防御素
• 1.3.4 昆虫防御素
• 1.3.5 植物防御素
• 1.4 防御素的分子生物学特征
• 1.4.1 防御素的基因结构及表达调控
• 1.4.2 防御素在染色体上的定位
• 1.4.3 生物合成
• 1.5 防御素的生物学作用
• 1.5.1 抗微生物活性
• 1.5.2 细胞毒性作用
• 1.5.3 免疫活性
• 1.5.4 其他生物活性
• 1.6 防御素的应用前景
• 1.6.1 在医药中应用
• 1.6.2 在植物抗病育种中的应用
• 1.6.3 在基因工程上的应用
• 1.6.4 θ-防御素的发现
• 1.7 结束语
• 2 材料与方法
• 2.1 实验材料
• 2.1.1 实验动物及其组织
• 2.1.2 药品和试剂
• 2.1.3 仪器设备
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 引物的设计
• 2.2.2 蒙古绵羊各组织总 RNA 的提取
• 2.2.3 RT-PCR 反应和cDNA 的扩增
• 2.2.4 用 RACE 方法扩增sBD-1 全长cDNA
• 2.2.5 用 RT-PCR 方法测蒙古绵羊组织表达
• 3 结果
• 3.1 总 RNA 的检测结果
• 3.2 RT-PCR 扩增结果
• 3.2.1 RT-PCR 产物的测序及序列分析结果
• 3.2.2 sBD-1 与其他动物的β-防御素氨基酸序列的比较
• 3.3 RACE 结果
• 3.3.1 3ˊRACE 结果
• 3.3.2 5ˊRACE 结果
• 3.4 蒙古绵羊sBD-1 cDNA 的全序列及同源性比较
• 3.4.1 蒙古绵羊sBD-1 cDNA 的全序列
• 3.4.2 蒙古绵羊sBD-1 mRNA 二级结构
• 3.4.3 蒙古绵羊sBD-1 cDNA 全序列与其它动物cDNA 全序列同源性的对比
• 3.4.5 蒙古绵羊sBD-1 肽序列分析
• 3.5 蒙古绵羊β-防御素sBD-1 的组织表达结果
• 3.5.1 总 RNA 的检测结果
• 3.5.2 RT-PCR 的扩增结果
• 3.5.3 RT-PCR 产物测序结果
• 4 讨论
• 4.1 关于模板RNA及RNA分离技术
• 4.2 RT-PCR 技术
• 4.3 关于3′RACE 和5′RACE
• 4.4 关于蒙古绵羊sBD-1 与其他动物β–防御素的同源性
• 4.5 蒙古绵羊β-防御素的分布特点
• 5 结论
• 致 谢
• 参 考 文 献
• 作 者 简 介