论文摘要
目的:通过观察重组人血管内皮抑制素（Rh-endostatin/Endostar/YH-16,恩度）、厄洛替尼（Erlotinib,Tarceva）以不同浓度单药及联合处理人肺腺癌细胞株A549后抑制细胞增殖及诱导自噬的效果,探讨自噬在抑瘤过程中的作用机制,从而为NSCLC的治疗提供新的思路。方法:以人肺腺癌细胞株A549为研究对象,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼三种不同处理后对A549细胞增殖抑制的影响并计算半数抑制浓度（IC50）、联合指数（CI）。透射电子显微镜下观察自噬体等超微结构的形态学改变。用Western blot法检测各组自噬特异性蛋白LC3-Ⅱ表达的差异。应用流式细胞术检测上述不同处理组对A549细胞周期的影响及细胞凋亡率的变化。结果:（1）经重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼三种处理后均可抑制A549细胞增殖,作用呈浓度依赖性,随药物浓度的增加,其抑制率增加（P<0.05）;重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼对A549细胞可产生协同作用,CI<1。（2）透射电镜下观察重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼组A549细胞自噬体数目较对照组增多,且两药联合组自噬体数目较单药组数量增多。（3）重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼各组随药物浓度增加处理后均可使A549细胞LC3-Ⅱ蛋白表达增多（P<0.05）,与对照组相比差别亦有显著统计学意义（P<0.05）;重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼组LC3-Ⅱ蛋白表达较对应浓度药物单独作用时明显增加（P<0.05）。（4）重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼各组均可引起细胞周期改变,重组人血管内皮抑制素组主要使G0/G1期细胞所占比例增加,处于S期细胞比例减少,与对照组相比差别有显著统计学意义（P<0.05）。与对照组相比,厄洛替尼主要使G0/G1期细胞所占比例增加,处于G2/M期细胞所占比例减少（P<0.05）。与对照组及药物单用时相比,重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼组G0/G1期细胞所占比例显著增多,S期细胞所占比例明显减少（P<0.05）。（5）与对照组相比,重组人血管内皮抑制素、厄洛替尼、重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼各组均可引起A549细胞凋亡率增加（P<0.05）;重组人血管内皮抑制素+厄洛替尼组细胞凋亡率较药物单用时显著增多（P<0.05）。结论:重组人血管内皮抑制素与厄洛替尼单独及联合作用均可抑制A549细胞的增殖,可诱导肺腺癌A549细胞的自噬,两种不同作用机制的靶向治疗药物具有协同作用,可能与激活自噬信号传导途径有关。此外,并可诱导细胞凋亡和影响细胞周期。
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