香菇多糖的制备、结构特性和生物活性的研究

论文摘要

香菇多糖因具有抗肿瘤、抗病毒、调节免疫等多种生物活性而备受关注。本论文以干香菇子实体为原料,建立了凝胶渗透色谱法同时测定香菇多糖分子量和含量的检测方法;对香菇多糖制备工艺、结构特性和生物活性进行了研究。研究内容和结果如下:1、建立了凝胶渗透色谱法（GPC）测定香菇多糖分子量和含量的检测方法该方法准确度和精密度高;专属性和耐用性好;检测限为0.468μg;定量限为1.6μg;在3.75μg120μg范围内线性关系良好,测定范围为1.6μg360μg。2、采用料液比1:20、95℃100℃、每次2h浸提3次的工艺水提香菇多糖,得率依次为15.73%,3.22%和0.56%。3、研究了香菇多糖的醇沉工艺及产物分子量分布情况研究表明:醇沉时间对香菇多糖获得影响不大,醇沉速度随时间延长而降低。分步醇沉在乙醇体积分数为30%时,得到的香菇多糖最多。分级醇沉所得到的香菇多糖随着乙醇体积分数的升高而增加。乙醇体积分数为30%、50%和80%得到的香菇多糖的峰位分子量（Mp）分别为22,671Da、18,694Da、6,011Da。4、研究了香菇多糖的脱色方法及工艺对比研究了树脂和H2O2脱色法;确定了H2O2脱色的最优工艺:H2O2的质量分数8.5%、溶液pH7,55℃脱色2h,此时脱色率为76.8%,香菇多糖的保留率为78.1%。在一定的脱色时间内,H2O2对香菇多糖分子量降解作用不明显。5、研究了香菇多糖的Sevage法除蛋白工艺。结果表明,当V三氯甲烷:V正丁醇=5:1、Vsevage试剂:V多糖=0.3:1,除蛋白5次效果最好,此时蛋白去除率为54.7%,香菇多糖的保留率为65.3%。6、对香菇多糖分离纯化进行了研究以DEAE-纤维素为填料,水、0.2M NaCl、0.4M NaCl溶液依次洗脱,获得的多糖的Mp分别为33,038Da、20,261Da和8,587Da。经过SephadexG-200水洗脱所得的香菇多糖Mp为35,064Da。使用膜分离一次效率高,但只能作为粗分离。7、研究了香菇多糖的结构特性结果表明经纯化的香菇多糖不含蛋白质、还原糖和淀粉,为β-呋喃葡萄糖构型,由甘露糖、葡萄糖和半乳糖三种单糖组成,摩尔比为1:0.633:0.745。8、初步研究了香菇多糖的生物活性结果表明,化学氧化法证实了不同产地、不同分子量的香菇多糖均具有清除DPPH·、羟自由基的能力。MTT试验表明高分子量香菇多糖对结肠癌细胞增值有抑制作用,低分子量香菇多糖几乎不具有抑制作用。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 香菇多糖的结构及理化性质、分布与来源
• 1.2.1 香菇多糖的结构
• 1.2.2 理化性质
• 1.2.3 香菇及香菇多糖的分布及来源
• 1.3 香菇多糖的生物学活性
• 1.3.1 免疫调节作用
• 1.3.2 抗肿瘤作用
• 1.3.3 抗氧化、延缓衰老作用
• 1.3.4 抗突变作用
• 1.3.5 抗病毒作用
• 1.3.6 抗感染作用
• 1.3.7 保肝作用
• 1.3.8 其它生物活性
• 1.4 多糖分离纯化工艺的研究进展
• 1.4.1 多糖沉淀粗分离方法
• 1.4.2 多糖的脱色方法
• 1.4.3 多糖的除蛋白方法
• 1.4.4 多糖分级分离纯化方法
• 1.5 多糖质量控制的研究进展
• 1.5.1 纯度
• 1.5.2 定性分析
• 1.5.3 定量分析
• 1.5.4 分子量
• 1.5.5 单糖组成及摩尔比测定
• 1.6 课题的立题背景及研究内容
• 1.6.1 立题背景
• 1.6.2 研究内容
• 第二章 GPC 法测定香菇多糖分子量和含量的方法建立
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料与试剂
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验试剂
• 2.3 实验仪器与设备
• 2.4 实验方法
• 2.4.1 香菇多糖的制备
• 2.4.2 GPC 法同时测定香菇多糖的分子量和含量的方法建立
• 2.5 实验结果与讨论
• 2.5.1 准确度考察结果
• 2.5.2 精密度考察结果
• 2.5.3 专属性考察结果
• 2.5.4 检测限和定量限考察结果
• 2.5.5 线性关系和范围考察结果
• 2.5.6 耐用性考察结果
• 2.5.7 样品分子量和含量的测定结果
• 2.6 本章小结
• 第三章 香菇多糖制备工艺研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料与试剂
• 3.3 主要仪器与设备
• 3.4 实验方法
• 3.4.1 香菇多糖的提取
• 3.4.2 香菇多糖醇沉工艺研究
• 3.4.3 香菇多糖脱色和除蛋白工艺研究
• 3.4.4 香菇多糖的柱层析和膜分离纯化研究
• 3.5 实验结果与讨论
• 3.5.1 香菇多糖提取的实验结果与讨论
• 3.5.2 香菇多糖醇沉工艺的实验结果与讨论
• 3.5.3 香菇多糖脱色和除蛋白工艺的实验结果与讨论
• 3.5.4 香菇多糖的柱层析和膜分离纯化的实验结果与讨论
• 3.6 本章小结
• 第四章 香菇多糖结构特性的初步研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料与试剂
• 4.2.1 主要材料
• 4.2.2 主要试剂
• 4.3 主要仪器与设备
• 4.4 实验方法
• 4.4.1 香菇多糖的颜色反应
• 4.4.2 香菇多糖的红外光谱扫描
• 4.4.3 香菇多糖的水解
• 4.4.4 HPLC 法分析香菇多糖的单糖组成
• 4.4.5 GC 法分析香菇多糖的单糖组成
• 4.5 实验结果与讨论
• 4.5.1 香菇多糖的颜色反应结果
• 4.5.2 香菇多糖的红外光谱扫描结果
• 4.5.3 HPLC 法分析香菇多糖的单糖组成结果
• 4.5.4 GC 法分析香菇多糖的单糖组成结果
• 4.5.5 HPLC 法和GC 法分析结果的比较
• 4.6 本章小结
• 第五章 香菇多糖生物活性研究
• 5.1 引言
• 5.2 实验材料与试剂
• 5.2.1 主要材料
• 5.2.2 主要试剂
• 5.3 主要仪器与设备
• 5.4 实验方法
• 5.4.1 香菇多糖溶液的配制
• 5.4.2 香菇多糖有机自由基 DPPH·清除能力的测定
• 5.4.3 香菇多糖对羟自由基清除率的测定
• 5.4.4 MTT 法测定香菇多糖抗结肠癌细胞增殖的抑制作用
• 5.5 实验结果与讨论
• 5.5.1 香菇多糖对 DPPH·清除能力的实验结果
• 5.5.2 香菇多糖对羟自由基的清除能力的实验结果
• 5.5.3 香菇粗多糖对结肠癌细胞的体外抑瘤作用的实验结果
• 5.6 本章小结
• 结论与展望
• 一、结论
• 二、创新之处
• 三、展望
• 参考文献
• 攻读硕士学位期间取得的研究成果
• 致谢