一、血清AFP、GGT-Ⅱ及sICAM-1联合检测诊断肝细胞性肝癌的价值 二、检测肝细胞性肝癌患者外周血中AFPmRNA的意义

论文摘要

目的:我国是肝病大国,中国每年有13万患者死于肝癌,占全球肝癌死亡总数的45%。因此对于提高肝细胞性肝癌的诊断率成为当前医学发展的一项重要任务。甲胎蛋白（AFP）作为肝细胞性肝癌特异的肿瘤标志物,应用于临床诊断HCC已有20余年。它是目前诊断肝细胞性肝癌的一项重要指标。但近年来亦发现一些良性肝胆疾病患者中AFP也可呈高值,与HCC有一定程度的重叠,更重要的是有部分HCC患者AFP呈低值甚至为阴性,有的文献报道其阴性率可达30%以上。因此以单一AFP作为HCC的肿瘤标志物容易造成HCC的漏诊和误诊,故考虑将多个肝癌肿瘤标志物联合检测逐渐成为临床提高肝细胞性肝癌确诊率的趋势。本文拟对HCC患者的血清或血清中的AFP、GGT-Ⅱ、sICAM-1进行联合检测。以证明三者联合检测比其单独检测可以明显提高HCC的确诊率。实验方法:本文对220例病人及正常人（包括HCC46例,肝转移癌18例,肝硬化42例,各型肝炎30例,良性肝肿瘤38例及正常对照者46例）的血清中的AFP、GGT-Ⅱ和sICAM-1分别用荧光酶联免疫吸附法、聚丙烯酰胺阶段梯度电泳、双抗体酶联免疫吸附法进行检测。结果：1.经相关分析证明46例HCC患者的AFP、GGT-Ⅱ、sICAM-1三者两两之间无任何相关性（P>0.05）。220例患者和正常对照组的AFP、GGT-Ⅱ、sICAM-1三者两两之间亦无任何相关性（P>0.05）。表明三者之间互不影响，因此可以将三者进行联合检测。2.由于文献报道，sICAM-1在HCC出现肝外转移时可明显升高，我们对HCC组中出现肝外转移和未出现肝外转移的患者进行了比较。发现sICAM-1在发生HCC肝外转移的患者血清中的浓度明显高于未发生肝外转移的患者，两者sICAM-1的阳性率前者（93.8％）亦明显高于后者（15.3％）。3.单纯测定AFP、sICAM-1、GGT-Ⅱ值，HCC组的阳性率仅76％、68％、92％，特异性为95％、90％、86％。而三者联合检测后，我们看到，虽然特异性略有下降，但其HCC检出的阳性率较三者单独检测时则有明显的提高，可达96％，对于HCC的诊断有重要意义。同时我们亦可以看到，单独检测AFP、sICAM-1、GGT-Ⅱ时的正确率为85％、78％、89％，漏诊概率为10.26%、15.32%、4.24%，Youden指数为0.71、0.58、0.78。而三者联合检测后，正确率为93％，漏诊概率为1.91%，Youden指数为0.86。经卡方检验，联合检测的漏诊概率与各项单独检测的漏诊概率相比较，P<0.01,有显著的统计学差异，故联合检测的有效性要明显优于单独检测。但正确率无显著的统计学差异（P>0.05）。讨论：甲胎蛋白作为肿瘤标志物应用于临床血清学诊断肝细胞性肝癌已有20余年，是目前临床诊断肝癌最常用、最有价值的血清学诊断指标，由于在临床应用中，AFP单独作为诊断肝细胞性肝癌的阳性率（灵敏度）在0.4～0.8之间，同时亦有部分肝癌病人AFP呈低浓度或阴性，可导致较高的漏诊率，本实验中AFP诊断肝细胞性肝癌的阳性率仅为76％，漏诊概率达到10.26%。故在临床上不能用作肝细胞性肝癌的排除诊断依据。从我们的观察结果中可以看出，在灵敏度方面GGT-Ⅱ为92％最高，AFP其次，为76％，sICAM-1最低，为68％。特异性方面，AFP为95％,sICAM-1为86％，GGT-Ⅱ为90％。正确率是GGT-Ⅱ89％,AFP85％，sICAM-1为78％,漏诊概率AFP为10.26%、sICAM-1为15.32%、GGT-Ⅱ为4.24%，Youden指数GGT-Ⅱ为0.78，AFP为0.71,sICAM-1为0.58。综合评价，GGT-Ⅱ虽然灵敏度、正确率较高，漏诊概率最低，准确性较好，但其特异性较AFP和sICAM-1低，AFP的特异性和正确率较高，但灵敏度低，漏诊概率较高，准确性一般。而sICAM-1在诊断肝细胞性肝癌方面灵敏度、准确性最低，漏诊概率最高但其特异性好，正确率尚可。但是如将HCC分成肝外转移和无肝外转移两组，则在发生肝外转移组，sICAM-1的灵敏度可达93.8％，而在无肝外转移组其灵敏度仅为15.3％。而AFP和GGT-Ⅱ与是否存在HCC的肝外转移无显著统计学差异（P>0.05）。这表明sICAM-1对于判断HCC患者是否存在肝外转移具有重要意义。有利于临床上尽早发现肝外病灶并予以积极治疗。在AFP阴性的11例HCC患者中，其中sICAM-1阳性3例，GGT-Ⅱ阳性8例，任一项阳性的检测为85％，两项均为阳性的检出率为86％。这充分表明sICAM-1和GGT-Ⅱ对AFP检测阴性HCC具有良好的补充作用，减少了AFP的漏诊概率，因此提示有必要进行三者的联合检测。在18例肝转移癌中，AFP均为阴性，sICAM-1仅1例阳性，而有12例GGT-Ⅱ呈阳性。这表明GGT-Ⅱ单独用来鉴别诊断HCC和肝转移癌方面特异性较差，应考虑与其他肿瘤标志物进行联合检测，可提高HCC诊断的特异性。AFP、sICAM-1、GGT-Ⅱ三者联合检测，在灵敏度方面，由其单独检测的68％～92％提高到96％。但是特异性有所下降，由其单独检测的86％～95％，降至90％。漏诊概率有明显的降低，由4.24％～15.32％，降至1.91％，有显著的统计学差异，可明显提高检出率，降低HCC诊断的假阴性和假阳性率。综合分析，AFP、sICAM-1、GGT-Ⅱ三者联合检测可提高HCC的检出的灵敏度、正确率和准确性，降低漏诊概率。但特异性会有所下降。结论：GGT-Ⅱ作为一个肝癌标志物，其在HCC患者中的检出率较高，达92％，明显优于AFP单项检测的76％的检出率。特异性亦高达90％，略低于AFP的95％。sICAM-1在发生肝外转移的HCC患者血清中的浓度明显高于未发生肝外转移的患者。表明检测血清中的sICAM-1的对于判断HCC患者是否发生肝外转移具有重要意义。AFP、GGT-Ⅱ、sICAM-1三者联合检测可明显提高HCC的检出的灵敏度、正确率和准确性，降低漏诊概率，故有必要进行肿瘤标志物的联合检测。目的：肝细胞性肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）是一种常见的恶性肿瘤,死亡率在全球男性中占第3位,女性中占第5位。我国每年有10余万患者死于此病。目前为止，手术切除仍是治疗肝癌的最佳方法,但术后复发转移是影响远期疗效的主要原因之一。复发转移率高是术前未发现的微转移灶或术中肝癌细胞在血中播散的结果。近年来国内外学者用高敏感的反转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术寻查HCC患者血循环中的癌细胞,用于早期发现微小的转移灶。ALb mRNA和AFPmRNA是两个近年常用于反映血循环中HCC细胞存在的指标。我们用巢式RT-PCR检测HCC患者和健康对照者外周血中的AFP mRNA表达水平,探讨其与肝细胞肝癌微转移的关系。实验方法：1.将40例肝细胞肝癌患者分为单个肿瘤结节组10例，2个及以上结节组10例，有远处转移组20例；2.再将以上患者分肿瘤直径小于等于5cm为15例，肿瘤直径大于5cm为25例；3.正常对照者40例。用巢式PCR检测以上各组外周血中AFPmRNA的表达水平。结果：1.10例单个结节肝癌中AFPmRNA阳性率为30%（3/10），10例2以上个结节肝癌中AFPmRNA阳性率为40%（4/10）,20例有远处转移灶的肝癌中AFPmRNA阳性率为90%（18/20）；2.15例肿瘤直径小于等于5cm肝癌中AFPmRNA阳性率为53.3%（8/15）,25例肿瘤直径大于5cm肝癌中AFPmRNA阳性率为76%（19/25）;3.40例正常对照者AFPmRNA阳性率为5%（2/40）。讨论：当肝细胞癌变时，表达AFP的细胞在肝癌转移过程中进入血液，成为肝癌微转移的标志。因为外周血中存在RNA酶，游离RNA不能独立存在，因此检出AFPmRNA即意味着外周血存在完整的产生AFP的细胞。本研究发现，肝细胞癌患者外周血中AFPmRNA的检出率62.5%（25/40 ），并且随着肿瘤的进展，AFPmRNA阳性率显著提高（单个癌结节30%, 2个以上癌结节40%,肝外转移灶90% ,P<0.05）。肿瘤进展程度与肿瘤大小、数目等因素有密切相关性，这和本研究的其他结果是一致的，即AFPmRNA的检出和肿瘤直径、数目显著相关（P<0.05 ）。肿瘤大小是癌细胞肝内外播散的影响因素之一，当肿瘤体积增加时，肿瘤细胞易从原发灶脱落入血。本研究还显示，在大于2个癌结节时，AFPmRNA的阳性率达40%，显著高于孤立癌灶的检出率（30 %）。根据日本肝癌研究组的建议，通过病理方法基本排除了多中心癌，因此多个癌结节可以看作肝内转移的结果。即外周血AFPmRNA阳性时容易出现肝内转移。在出现肝外转移的20例肝细胞癌中，AFPmRNA的阳性率为90%，和无肝外转移组（35%）比较，有明显统计学差异（P<0.05 ）。结论：肝细胞性肝癌患者外周血中的AFPmRNA的检出和肿瘤直径、数目、肿瘤发展程度显著相关，它的表达水平是反映肝细胞性肝癌患者血中是否存在肝癌细胞的灵敏指标,对肝癌的早期诊断、检测肝癌的微转移有重要的临床价值。

论文目录

• 缩略语表
• 第一部分血清AFP、GGT-Ⅱ及SICAM-1 联合检测诊断肝细胞性肝癌的价值
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 1.材料
• 2.方法
• 3.结果
• 4.讨论
• 小结
• 参考文献
• 缩略语表
• 第二部分检测肝细胞性肝癌患者外周血中AFPM RNA 的意义
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 1.材料
• 2.方法与步骤
• 3.结果
• 4.讨论
• 小结
• 参考文献
• 附图
• 个人简历和研究成果
• 致谢