论文摘要
目的:（1）评价吉非替尼治疗中晚期非小细胞肺癌（NSCLC）患者的疗效。（2）检测接受吉非替尼治疗的中晚期NSCLC患者肿瘤组织标本中表皮生长因子受体（EGFR）酪氨酸激酶区域、K-RAS基因的突变情况以及P16基因启动子区的甲基化状态,分析EGFR、K-RAS基因突变、P16基因启动子区甲基化与吉非替尼疗效之间的关系。（3）探讨吉非替尼对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化模型的影响及其作用机制。方法:（1）29例经病理证实的中晚期NSCLC患者,口服吉非替尼250mg/日治疗,疗效评价采用RECIST标准。（2）回顾性收集29例患者的石蜡肿瘤组织标本,提取组织标本的DNA,PCR方法扩增EGFR基因18～21外显子、K-RAS基因外显子2,甲基化特异性PCR方法扩增P16基因启动子区,扩增结果行测序检测EGFR基因和K-RAS基因的突变情况以及P16基因启动子区的甲基化水平,分析EGFR、K-RAS基因突变、P16基因启动子区甲基化与吉非替尼疗效之间的关系。（3）将C57BL/6小鼠分为四组:盐水+盐水组,盐水+吉非替尼组,博莱霉素+盐水组,博莱霉素+吉非替尼组。经气管滴注博莱霉素的方法诱导小鼠肺纤维化模型的形成。分别于14天和21天两个时间点取小鼠标本进行分析。采用HE染色、MASSON染色和p-EGFR、S100A4的免疫组化染色对小鼠标本行病理学评价,使用实时定量PCR的方法分析小鼠标本中E-cadherin、CollagenⅠ、CollagenⅢ的含量以及western blot的方法测定p-EGFR、S100A4和β-actin的蛋白量表达水平。结果:（1）本研究中共有29例经病理证实的中晚期NSCLC患者接受吉非替尼口服治疗,患者的客观肿瘤缓解率为37.9%,疾病控制率为72.4%,平均无进展生存期（PFS）为10.0个月,平均总体生存期（OS）为16.8个月,1年生存率为51.7%。吉非替尼的疗效与患者的性别、病理类型及吸烟情况显著相关（P＜0.05）。共有23例（79.3%）患者出现吉非替尼治疗的副作用,副作用主要表现为Ⅰ/Ⅱ度的皮疹（65.5%）和腹泻（27.6%）,入组的29例患者无一例发生间质性肺炎等严重并发症。（2）患者肿瘤组织标本的突变检测发现11例患者（37.9%）携带有EGFR基因突变,4例患者（13.8%）带有K-RAS基因突变。EGFR基因突变与患者的吉非替尼治疗疗效之间呈正相关关系（P＜0.05）,对患者吉非替尼治疗后总体生存期的延长有显著性意义。K-RAS基因突变与患者吉非替尼疗效之间呈负相关关系（P＜0.05）,对患者吉非替尼治疗后无进展生存期和总体生存期的缩短有统计学意义。在P16基因的甲基化检测中,15例患者（55.6%）被检测到有P16基因启动子区的高甲基化,但P16基因的甲基化水平与患者的临床特征及吉非替尼疗效之间没有相关关系。（3）HE染色与MASSON染色结果显示:盐水+吉非替尼组的病理表现与盐水+盐水组相似,吉非替尼没有诱导出明显的肺纤维化表现;博莱霉素+盐水组的肺纤维化程度高于博莱霉素+吉非替尼组。免疫组化染色结果显示:博莱霉素+吉非替尼组的p-EGFR和S100A4的表达量低于博莱霉素+盐水组。实时定量PCR分析结果表明,盐水+吉非替尼组的胶原Ⅰ和胶原Ⅲ的含量与盐水+盐水组无差异;博莱霉素+盐水组胶原Ⅰ和胶原Ⅲ的表达量在21天时明显增高;而与博莱霉素+盐水组相比,博莱霉素+吉非替尼组的胶原Ⅰ和胶原Ⅲ的含量呈下降趋势,E-cadherin在各组间的表达量没有显著性差异。western blot分析结果表明,β-actin的表达量在各组间无差异;盐水+盐水组与盐水+吉非替尼组p-EGFR和S100A4的表达量无差异;博莱霉素+吉非替尼组p-EGFR蛋白表达水平低于博莱霉素+盐水组,博莱霉素+吉非替尼组S100A4的表达量与博莱霉素+盐水组差异不明显。结论:（1）吉非替尼对于二线化疗失败的中晚期NSCLC患者有效且患者耐受性较好。（2）EGFR基因突变与患者吉非替尼的疗效有正相关关系。K-RAS基因突变与患者吉非替尼的疗效呈负相关关系。P16基因启动子区的高甲基化与患者吉非替尼疗效和生存期之间没有相关关系。（3）本研究中未发现吉非替尼有加重博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的作用。
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