论文摘要
背景近年来,随着乳腺癌的诊疗技术的进步以及人们自我保健意识的加强,乳腺癌患者的死亡率正逐渐下降,生活中经历过或正在经历乳腺癌的人们越来越多。肿瘤相关性疲劳（cancer related fatigue, CRF）的产生与癌症或癌症的治疗相关,并且干扰患者正常生活,极大地影响了癌症患者的生活质量。因此,如何提高这部分日益增多的人群的生活质量就变得十分重要。目前,CRF越来越引起国内外学者的关注,但CRF发生的病理生理学机制仍然不是很清楚。现代西医学临床上仍缺乏有效的干预手段,这为中医药干预CRF提供了展示的机遇。CRF的治疗要立足于肿瘤疾病本身,中医认为正气不足是肿瘤发生的内在根本原因,气血阴阳失衡、脏腑功能紊乱是它的病理基础,其基本病理变化除正气亏虚外,更有气滞、血瘀、痰结、湿聚、热毒等相互纠结,日久积滞而成有形之肿块。CRF是在肿瘤的基础上形成的。因此,可认为CRF是一种病因明确,治疗多变,以虚损为主,夹有实邪的病证,病理属性总属本虚标实；正气不足,毒瘀内存为其基本病机。因此中医药干预CRF在尽可能消除疲劳相关原因之外,还应强调中医的扶正与祛邪相辅相成,辨证论治,重视整体调节,立足于补养脾肾,行气祛瘀。中医理论指出：“脾为后天之本,气血生化之源,主肌肉四肢”、“肝藏血,肝主筋,为罢极之本”、“肾为先天之本,生命之根,主骨生髓,为作强之官,伎巧出焉”。故认为疲劳与中医肺、脾、肝、肾功能失调密切相关。在此理论基础上,本课题组研制出防治疲劳的中药复方——维康颗粒,从肺、脾、肝、肾着手,具有滋补肝肾、健脾润肺、益气养阴之功效,从而通过多种途径改善疲劳,提高人的生活质量。因此,本论文从主补肝脾肾,兼以理气祛瘀着手,选择维康颗粒,用其在乳腺癌小鼠模型上进行干预CRF的相关实验研究,以期为临床运用维康颗粒干预CRF提供实验依据,并揭示其作用机制。目的通过建立乳腺癌小鼠CRF模型,评价自制中药复方维康颗粒对由肿瘤本身及肿瘤化疗所引起的乳腺癌小鼠CRF的作用,并明确中药复方维康颗粒缓解CRF的代谢组学机制及缓解化疗引起的相关性疲劳的基因组学机制。方法1.维康颗粒缓解CRF的代谢组学机制：实验前,将所有雌性BALB/c小鼠置于游泳箱适应性游泳训练2天,5min/天,水温25℃±1℃。剔除游泳时间过长和过短的小鼠以及过于兴奋和过于安静的小鼠。然后,随机抽取10只小鼠作为正常对照（NS, po,20ml/kg, qd）组,剩余小鼠为待制备乳腺癌小鼠CRF模型组。将1×105cells/ml的4T1乳腺癌细胞接种于小鼠右侧腹壁第4对乳房脂肪垫区域的皮下,制备乳腺癌小鼠CRF模型。当瘤块长到50mm3～100mm3（接种后第7天）的时候,按瘤体积随机分为4组,每组10只,分别为肿瘤对照（NS, po,20ml/kg, qd）组、紫杉醇（PTX, ip,10mg/kg, q2d）组、维康颗粒（WKKL, po,6g/kg, qd）组、维康颗粒+紫杉醇（WKKL, po,6g/kg, qd; PTX, ip,10mg/kg, q2d）组。上述5组小鼠分别进行以下几个方面的实验：（1）维康颗粒对荷瘤小鼠的一般情况的影响：观察实验过程中各组小鼠的体重、精神状态、活动情况、饮食以及皮毛外观变化。每周对上述小鼠的一般情况进行一次评价。（2）维康颗粒对荷瘤小鼠的行为学影响：给药的第12天对所有小鼠进行旷场实验。主要观察小鼠在实验箱内的总运动距离、外周格运动距离、中央格运动距离、理毛次数、大便粒数、爬壁次数。于末次给药后30min,观察小鼠6min内的悬尾不动时间。（3）维康颗粒的对荷瘤小鼠的生存时间的影响：末次药后,不再给予任何干预措施,动态观察荷瘤小鼠生存时间,并计算各组小鼠的中位生存时间、平均生存时间及生命延长率。（4）维康颗粒对荷瘤小鼠的抗疲劳作用：于开始给药前、给药后的第10天、第20天,用7%体重的铅坠系于小鼠尾部,将小鼠放入水温25℃±1℃的游泳箱中进行力竭游泳测试,并记录力竭游泳时间。（5）维康颗粒对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用：另取上述4组荷瘤小鼠,各组小鼠自接受治疗开始,每3天测量肿瘤体积。在末次给药1小时后,摘眼球采血,分离血浆,置-80℃保存,用于代谢组学研究。并剥离瘤块并称重,计算抑瘤率。（6）维康颗粒对荷瘤小鼠脏器指数的影响：取前一实验中分离并称重的脾脏、胸腺、肾上腺等器官,按对应的每只小鼠的体重计算脏器指数。（7）维康颗粒对乳腺癌小鼠CRF血浆代谢组学的研究：应用核磁共振氢谱（1H-NMR）技术获取前面实验中小鼠血浆中的原始代谢指纹图谱信息,通过数据采集处理获得各样本数据信息,采用多元数据统计方法（PCA、PLS-DA、 OPLS-DA）模式识别等方法进行数据处理,得到5组小鼠血浆代谢概况,并进行组间两两比较。最后结合模型VIP值、归一化积分值筛选出两两组间小鼠血浆有差异的代谢物（潜在分子标志物）,结合数据库和文献进行代谢物鉴定,并分析相关代谢途径变化,揭示乳腺癌小鼠CRF的发生机制、WKKL缓解乳腺癌小鼠CRF的作用机制。2.维康颗粒缓解化疗引起的相关性疲劳的基因组学机制：另取25只雌性BALB/c小鼠置于小鼠于游泳箱（高30cm,直径25cm）适应性游泳训练2天,5min/天,水温25℃±1℃。剔除游泳时间过长和过短的小鼠以及过于兴奋和过于安静的小鼠。按游泳时间随机分为3组,每组6只,共18只。分别为正常对照（NS, po,20ml/kg, qd）组、紫杉醇（PTX, ip,10mg/kg, q2d）组、维康颗粒+紫杉醇（WKKL, po,6g/kg, qd; PTX, ip,10mg/kg, q2d）组。上述3组小鼠分别进行以下几个方面的实验：（1）维康颗粒对化疗小鼠的一般情况的影响：观察实验过程中各组小鼠的体重、精神状态、活动情况、饮食以及皮毛外观变化。每周对上述小鼠的一般情况进行一次评价。（2）维康颗粒对化疗小鼠的抗疲劳作用：于开始给药前、给药后的第7天、第14天,用7%体重的铅坠系于小鼠尾部,将小鼠放入水温25℃±1℃的游泳箱中进行力竭游泳测试,并记录力竭游泳时间。（3）维康颗粒对化疗小鼠骨骼肌基因组学的研究：应用基因芯片技术获取前面实验中小鼠骨骼肌中的原始基因信息,应用Affmetrix的GCOSvl.4（genechip operating software versionl.4）对荧光信号的强度和比值进行计算和统计分析,得到各芯片的单张分析结果,对芯片进行质量控制处理。用SAM （significant analysis of microarray）分析法,总体比较PTX组与正常对照组,PTX组与WKKL+PTX组间的基因表达有无显著性差异。结合数据库和文献进行基因成分、功能、进程鉴定,并分析相关通路变化,揭示化疗相关性疲劳的发生机制、WKKL缓解化疗相关性疲劳的作用机制。结果1.维康颗粒缓解CRF的代谢组学机制：（1）维康颗粒对荷瘤小鼠的一般情况的影响：给药干预前,5组小鼠之间的精神状态、活动情况、饮食以及皮毛外观等一般情况未见有显著差别。各组小鼠均活泼好动,皮毛光洁整齐,眼睛有神,对食物敏感,逃避反应快。整个实验期间,NC组小鼠均保持活泼好动、皮毛光洁整齐、对食物敏感、逃避快。与NC组的小鼠比较,其余4组荷瘤小鼠均逐渐出现毛发稀疏、不活泼、行动迟缓和进食减少等现象。实验结束时,4组荷瘤小鼠的一般情况从差到相对较好依次为PTX组、TC组、WKKL+PTX组、WKKL组。干预前,各组小鼠的体重无显著差别（F=0.100,P=0.982）。NC组小鼠的体重逐渐增加。而随着肿瘤的生长,在干预2周和第3周时,TC组小鼠的体重均较NC组显著减轻（P=0.000）、PTX组小鼠的体重均较TC组显著减轻（P<0.05～0.01）、WKKL+PTX组小鼠的体重较PTX组显著增加（P<0.05～0.01）。（2）维康颗粒对荷瘤小鼠的行为学影响：①旷场实验结果：TC组、PTX组小鼠的5min内的总运动距离（PTC组=0.014、PPTX组=0.003）、外周格运动距离（PTC组=0.000、PPTX组=0.000）较NC组小鼠均显著减少。而WKKL+PTX组小鼠的外周格运动距离较TC组（P=0.006）、PTX组（P=0.044）小鼠显著增加。TC组小鼠较NC组小鼠的爬壁次数显著减少（P=0.039）、理毛次数显著减少（P=0.006）。PTX组小鼠较TC组小鼠的大便粒数显著减少（P=0.000）、爬壁次数显著减少（P=0.003）。WKKL+PTX组小鼠较TC组小鼠的大便粒数显著减少（P=0.000）; WKKL+PTX组小鼠的大便粒数较PTX组增加,但是无显著意义。②悬尾实验结果：与NC组小鼠相比,TC组小鼠的不动时间有所延长,但无显著差异（P=0.308）。与TC组小鼠比较,WKKL组（P=0.004）、WKKL+PTX组（P=0.001）小鼠的不动时间显著缩短。（3）维康颗粒的对荷瘤小鼠的生存时间的影响：与TC组比较,PTX组（P=0.043）、WKKL组（P=0.007）、WKKL+PTX组（P=0.000）小鼠的中位生存时间及平均生存时间均显著延长。与PTX组比较,WKKL+PTX组小鼠的中位生存时间及平均生存时间均显著延长（P=0.039）。与TC组小鼠相比,WKKL+PTX组、WKKL组和PTX组3组小鼠的生命延长率分别为21.61%、13.07%和8.54%。（4）维康颗粒对荷瘤小鼠的抗疲劳作用：①同一时间点各组小鼠力竭游泳时间的比较：干预前,5组小鼠的力竭游泳时间无显著差异（P=0.992）。干预第10天时,与NC组比较,荷瘤小鼠的力竭游泳时间显著减少（P<0.01）；与TC组比较,NC组小鼠的力竭游泳时间显著延长（P=0.000）, PTX组小鼠的力竭游泳时间显著减少（P=0.014）、而WKKL组（P=0.381）、WKKL+PTX组（P=0.717）的游泳时间与之相比无显著差异。与PTX组比较,其余4组小鼠的力竭游泳时间显著延长（P<0.05～0.01）。干预20天时,与NC组比较,荷瘤组小鼠的力竭游泳时间显著减少（P<0.01）。与TC组比较,NC组小鼠的力竭游泳时间显著延长（P=0.000）,而PTX组、WKKL组、WKKL+PTX组的游泳时间无显著差异（P>0.05）。与PTX组比较,NC组、WKKL组、WKKL+PTX组小鼠的力竭游泳时间显著延长（P<0.05～0.01）。②不同时间点的同组小鼠力竭游泳时间比较：NC组小鼠与干预前比较,干预第10天（P=0.000）、干预第20天（P=0.000）的游泳时间显著延长：与干预第10天比较,干预第20天时小鼠的游泳时间显著延长（P=0.004）。TC组小鼠与干预前比较,干预第10天（P=0.015）,干预第20天的游泳时间均显著下降（P=0.000）；与干预第10天比较,干预第20天时小鼠的游泳能力显著下降（P=0.000）。PTX组小鼠与干预前比较,干预第10天（P=0.000）、干预第20天（P=0.000）的游泳时间均显著下降；与干预第10天比较,干预第20天时小鼠的游泳能力显著下降（P=0.000）。WKKL组小鼠与干预前比较,干预第10天小鼠的游泳能力均呈现下降的趋势（P=0.241）,但无显著变化,干预第20天时小鼠的游泳能力显著下降（P=0.007）；与干预第10天比较,干预第20天时小鼠的游泳能力无显著变化（P=0.638）。WKKL+PTX组小鼠与干预前比较,干预第10天（P=0.051）时小鼠的游泳能力无显著下降,干预第20天时小鼠的游泳能力显著下降（P=0.039）；与干预第10天比较,干预第20天时小鼠的游泳能力无显著变化（P=0.464）。（5）维康颗粒对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用：实验结束时,与TC组比较,WKKL+PTX组（P=0.007）PTX组（P=0.037）的瘤重均显著减轻。与TC组比较,WKKL+PTX组、WKKL组、PTX组的肿瘤体积显著变小（P<0.05～0.01）。WKKL+PTX组、WKKL组和PTX组3组小鼠的抑瘤率分别为22.24%、15.36%和16.89%。（6）维康颗粒对荷瘤小鼠脏器指数的影响：①脾指数：与NC组比较,其余4组的脾指数均显著升高（P=0.01）。与TC组比较,PTX组、WKKL组、WKKL+PTX组的脾指数无显著差异（P>0.05）。与PTX组比较,WKKL组、WKKL+PTX组的脾指数无显著差异（P>0.05）。②胸腺指数：与NC组比较,其余4组的胸腺指数显著下降（P<0.01）。与TC组比较,PTX组的胸腺指数显著下降（P=0.001）,WKKL组（P=0.460）、WKKL+PTX组（P=0.588）小鼠的胸腺指数无显著差异。与PTX组比较,WKKL组（P=0.010）、WKKL+PTX组（P=0.006）小鼠的胸腺指数显著升高。③肾上腺指数：与NC组比较,TC组、PTX组的肾上腺指数显著升高（P<0.01）。与TC组比较,WKKL+PTX组小鼠的肾上腺指数显著降低（P=0.037）。与PTX组比较,WKKL组、WKKL+PTX组小鼠的肾上腺指数无显著差异（P>0.05）。（7）维康颗粒对乳腺癌小鼠CRF血浆代谢组学的研究：①五组小鼠之间血浆NMR的分析：用PLS-DA模型,最终计算出5组小鼠血浆样本共有2个主成分,5组之间基本分离,且各组相关集中,组间可基本区分。②NC组与TC组组间两两比较：采用PCA、PLS-DA方法进行数据处理和模式识别后,TC组和NC组各自集中,两组可完全区分。进一步用OPLS-DA模型处理数据后,两组样本集中趋势更显著,分类效果更好。综合载荷矩阵图、S图、VIP值、归一化积分值共筛选得到16个有统计学意义的变量（P<0.05～0.01）。与NC组小鼠比较,TC组小鼠血浆中的乳酸、甘油磷酸酯、精胺、亮氨酸、丙氨酸、葡萄糖-6-磷酸、3-羟基丁酸水平升高,肌醇、磷酸胆碱、辅酶A、辛酰甘氨酸、3-羟基异戊酸、神经酸、甲基丙二酸、天冬氨酸水平下降。③TC组与PTX组小鼠组间两两比较：采用PCA、PLS-DA方法进行数据处理和模式识别后,TC组和PTX组各自集中,两组可完全区分。进一步用OPLS-DA模型处理数据后,两组样本集中趋势更显著,两组小鼠两组样本之间显著区分,但PTX组样本之间较TC组分散。综合载荷矩阵图、S图、VIP值、归一化积分值共筛选得到13个有统计学意义的变量（P<0.05～0.01）。与TC组小鼠比较,PTX组小鼠血浆中的瓜氨酸水平升高,肌醇、磷酸胆碱、异柠檬酸、甘油磷酸酯、亚油酸、谷氨酰胺、辅酶A、天冬氨酸、丝氨酸、高半胱氨酸、赤藓糖水平下降。④TC组与WKKL组组间两两比较：采用PCA、PLS-DA方法进行数据处理和模式识别后,TC组和WKKL组各自集中,两组可完全区分。进一步用OPLS-DA模型处理数据后,两组样本集中趋势更显著,分类效果更好。综合载荷矩阵图、S图、VIP值、归一化积分值共筛选得到1个有统计学意义的变量（P<0.05～0.01）。与TC组小鼠比较,WKKL组小鼠血浆中的甘油磷酸酯水平升高。⑤TC组与WKKL+PTX组组间两两比较：采用PCA、PLS-DA方法进行数据处理和模式识别后,TC组和WKKL+PTX组各自集中,两组可完全区分。进一步用OPLS-DA模型处理数据后,两组样本集中趋势更显著,分类效果更好。综合载荷矩阵图、S图、VIP值、归一化积分值共筛选得到17个有统计学意义的变量（P<0.05～0.01）。与TC组小鼠比较,WKKL+PTX组小鼠血浆中的的肌醇、二羟基丙酮、磷酸胆碱、亚精胺、3-羟基丁酸、丙二酸、天冬氨酸、丝氨酸、L-缬氨酸、丙酮酸、琥珀酸半醛、氨基己酸、β-丙氨酸水平下降,丙酰甘氨酸、瓜氨酸、异亮氨酸、辛酰甘氨酸、2-羟基丁酸水平升高。⑥PTX组与WKKL+PTX组组间两两比较：采用PCA、PLS-DA方法进行数据处理和模式识别后,PTX组和WKKL+PTX组各自集中,两组可完全区分。进一步用OPLS-DA模型处理数据后,两组样本集中趋势更显著,分类效果更好。综合载荷矩阵图、S图、VIP值、归一化积分值共筛选得到5个有统计学意义的变量（P<0.05-0.01）。与PTX组小鼠比较,WKKL+PTX组小鼠血浆中的神经酸、辅酶A、磷酸烯醇丙酮酸、肌醇、赤藓糖水平升高。⑦WKKL组与WKKL+PTX组组间两两比较：采用PCA、PLS-DA方法进行数据处理和模式识别后,WKKL组和WKKL+PTX组两组分离趋势增强,但仍存在一定的重叠,两组尚未能完全区分开来。进一步用OPLS-DA模型处理数据后,两组样本集中趋势更显著,分类效果更好。综合载荷矩阵图、S图、VIP值、归一化积分值共筛选得到12个有统计学意义的变量（P<0.05～0.01）。与WKKL组小鼠比较,WKKL+PTX组小鼠血浆中的丙酰甘氨酸、瓜氨酸、甘油磷酸酯、2-羟基丁酸、辛酰甘氨酸、异亮氨酸、皮质酮、异阿魏酸、四氢叶酸、苯丙氨酸、丙氨酸水平升高,磷酸胆碱水平下降。2.维康颗粒缓解化疗引起的相关性疲劳的基因组学机制：（1）维康颗粒对化疗小鼠的一般情况的影响：给药干预前,3组小鼠之间的精神状态、活动情况、饮食以及皮毛外观等一般情况未见有显著差别。各组小鼠均活泼好动,皮毛光洁整齐,眼睛有神,对食物敏感,逃避反应快。整个实验过程中,NC组小鼠的上述情况未有显著变化。与NC组的小鼠比较,其余2组化疗小鼠均逐渐出现毛发稀疏、聚集、不活泼、行动迟缓和进食减少等现象,但WKKL+PTX组小鼠的一般情况较PTX组要好。干预前,各组小鼠的体重无显著差别（F=0.066,P=0.936）。NC组小鼠的体重逐渐增加,干预7天时,NC组小鼠的体重较干预前显著增加（P=0.002）, PTX组小鼠体重较干预前减少、WKKL+PTX组小鼠体重较干预前增加,但是无显著差异。与PTX组小鼠体重相较,NC组（P=0.001）, WKKL+PTX组（P=0.002）均有显著性差异。干预14天时,NC组及WKKL+PTX组小鼠的体重较干预前显著增加（P=0.05～0.01）,但较干预1周时无显著增加。PTX组小鼠的体重较干预前（P=0.009）、干预7天（P=0.008）时均显著减轻。与PTX组小鼠体重比较,NC组（P=0.000）、WKKL+PTX组（P=0.000）的小鼠体重均分别有显著差异。（2）维康颗粒对化疗小鼠的抗疲劳作用：①同一时间点各组小鼠力竭游泳时间的比较：干预前,3组小鼠的力竭游泳时间无显著差异（P=0.992）。干预第7天时,与NC组比较,PTX组（P=0.000）、WKKL+PTX组（P=0.001）小鼠的力竭游泳时间显著减少；但PTX组与WKKL+PTX组小鼠的力竭游泳时间无显著差异。干预14天时,与NC组比较,PTX组（P=0.000）、WKKL+PTX组（P=0.002）小鼠的力竭游泳时间显著减少。与PTX组比较,NC组（P=0.000）、WKKL+PTX组（P=0.007）组小鼠的力竭游泳时间显著延长（P=0.01）。②不同时间点的同组小鼠力竭游泳时间结果：随着干预时间的增加,NC组小鼠的游泳能力呈现逐步增加的趋势,PTX组小鼠的游泳能力呈现逐渐下降的趋势,WKKL+PTX组小鼠的游泳能力呈现波动性的增加趋势。对于NC组小鼠而言,与干预前比较,干预第7天（P=0.026）、干预第14天（P=0.011）的游泳时间均显著延长；与干预第10天比较,干预第20天时小鼠的游泳时间显著延长（P=0.022）。对于PTX组小鼠而言,与干预前比较,干预第7天（P=0.029）、干预第14天（P=0.002）的游泳时间均显著下降；与干预第7天比较,干预第14天时小鼠的游泳能力无显著差异（P=0.053）。对于WKKL+PTX组小鼠而言,与干预前比较,干预第7天时（P=0.336）、干预第14天时（P=0.284）小鼠的游泳能力先下降后上升,但无显著差异；与干预第7天比较,干预第14天时小鼠的游泳能力无显著变化（P=0.134）。（3）维康颗粒对化疗小鼠骨骼肌基因组学的研究：对PTX组、WKKL+PTX组和正常对照组芯片中每张芯片上44171条基因的比值Ratio,根据前面所设条件进行分析,得出PTX组vs正常对照组与PTX组vs WKKL+PTX组的交集存在差异表达基因共47条。其中,PTX组表达水平上调（Ratio值大于2）的有39条,表达水平下调（Ratio值小于0.5）的有8条。①参与线粒体能量代谢的基因有Atp4a、Pla2glb、Pikfyve、Lpin2、Pld4、Ppm1h、Acot10等。其中PTX组基因Atp4a表达下调,WKKL+PTX组基因Atp4a表达上调。PTX组基因Pla2glb表达上调,而WKKL+PTX组基因Pla2glb表达下调。②参与炎症反应、体液免疫反应、细胞粘附、防御应答等与免疫功能相关的基因如S100a9、Igh-6、Ghrl等。PTX组S100a9、Igh-6呈上调趋势,Ghrl表达下调,WKKL+PTX组S100a9、Igh-6呈下调趋势,Ghrl表达上调。③两组的差异表达基因涉及到多个信号转导通路,包括VEGF signaling pathway（血管内皮细胞因子信号通路）、Fc epsilon RI signaling pathway （Fc epsilon RI信号通路）、MAPK signaling pathway（丝裂原活化蛋白激酶信号通路）、GnRH signaling pathway（促性腺激素释放激素信号通路）、Phosphatidylinositol signaling system（磷脂酰肌醇信号系统）等。结论1、本实验中的乳腺癌小鼠模型存在CRF,且CRF的程度随肿瘤的生长而加重。乳腺癌小鼠CRF的发生机制可能与肿瘤本身的增殖所导致的三羧酸循环、脂肪酸代谢、β-丙氨酸代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭、线粒体电子传递链、氨基酸代谢、葡萄糖-丙氨酸循环、糖异生等多个代谢通路紊乱有关。2、应用PTX化疗可加重乳腺癌小鼠的CRF,且CRF的程度随化疗的时间延长而加重。PTX加重乳腺癌小鼠的CRF的发生机制可能与PTX引起小鼠丙酮酸代谢、三羧酸循环、氨基酸代谢、亚精胺和精胺代谢、脂肪酸代谢、半乳糖代谢、肌醇代谢、磷酸肌醇代谢、甘氨酸和丝氨酸代谢、同型半胱氨酸降解、甘油脂质代谢、甘油磷酸穿梭等多个代谢通路紊乱有关。3、单独应用WKKL能显著改善荷瘤小鼠的一般情况、延长小鼠生存时间,实验过程中有缓解乳腺癌小鼠CRF的作用的趋势,但无统计学差异。WKKL对乳腺癌小鼠CRF的影响可能是通过调节脂质代谢、甘油磷酸穿梭、磷脂的合成、线粒体电子传递链等多个代谢通路有关。4、WKKL和PTX联合应用能显著改善由肿瘤本身及肿瘤化疗所引起的CRF,且效果比单独应用WKKL好。WKKL和PTX联合应用缓解乳腺癌小鼠的CRF作用机制可能是通过调节三羧酸循环、脂肪酸代谢、丙酸代谢、丙酮酸代谢、亚精胺和精胺代谢、氨基酸代谢、葡萄糖-丙氨酸循环、糖异生、丙酮酸代谢、肌醇代谢、甘油磷酸穿梭、线粒体电子传递链、苹果酸-天冬氨酸穿梭、磷脂的合成等多个代谢通路有关。5、WKKL能显著改善由化疗所引起的疲劳,WKKL缓解化疗所引起的疲劳的作用机制可能是通过对能量代谢、免疫功能、信号转导通路（MAPK信号传导通路、GnRH信号传导通路等）及细胞因子等方面相关的基因表达的影响有关。