变异链球菌htrA及clpP基因对其生长特征影响的初步研究

论文摘要

目的建立变异链球菌标准株、htrA基因缺陷株、clpP基因缺陷株及htrA-clpP双基因缺陷株的生长模型,观察比较几种菌株在不同碳源条件下的生长情况的差异；通过检测试剂监测各菌株在不同碳源培养基中生长过程中消耗碳源情况的差异来分析比较clpP基因及htrA基因在变异链球菌生长能力方面的功能。方法利用变异链球菌标准株及前期实验构建成功的htrA基因缺陷株、clpP基因缺陷株及htrA-clpP双基因缺陷株,将其分别培养在含有1%葡萄糖、1%蔗糖及无碳源的TPY培养基中,在37℃微需氧条件下培养,采用酶联免疫检测仪,以一定的时间间隔测定各菌株在各时间点的吸光度值（A值）分别确定各菌株在各培养条件下的生长曲线,同时通过葡萄糖氧化酶法试剂盒及蒽酮-硫酸法测定各菌株在其生长过程中的耗糖情况。分别比较各碳源条件下各菌株的生长曲线和耗糖情况的差异。结果在含有1%葡萄糖的普通TPY培养基中,缺陷株生长的对数期较标准株短,且吸光度值的峰值明显低于标准株（p<0.05）。在整个生长期三种缺陷株的OD值都较接近,无明显差异。在对数期阶段,三种缺陷株的耗糖量均明显高于标准株,而进入平台期后各缺陷株与标准株的耗糖量逐渐接近,但在各个时间点各种缺陷株与标准株耗糖量的差别均有统计学意义（p<0.05）。在蔗糖作为碳源的条件下培养时,各菌株吸光度值的峰值均高于葡萄糖条件下生长时的同种菌株,标准株消耗蔗糖的量稍低于各缺陷株（p<0.05）,缺陷株的耗糖情况无明显差异（p<0.05）。无碳源条件下,标准株和缺陷株的细胞增殖能力及吸光度值均明显较葡萄糖条件下低,并且缺陷株的吸光度值峰值低于标准株。结论变异链球菌的htrA基因和clpP基因对其生长、耗糖能力以及饥饿耐受能力均有一定的影响,变链菌的标准株和缺陷株在蔗糖作为碳源时菌株的生长能力均较葡萄糖条件下降。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 缩略语语/符号说明
• 前言
• 研究现状、成果
• 研究目的、方法
• 一、变链菌标准株及各缺陷株的复苏,鉴定与培养
• 1.1 对象和方法
• 1.1.1 菌株和培养基
• 1.1.2 主要试剂
• 1.1.3 主要设备
• 1.1.4 实验方法
• 1.2 结果
• 1.2.1 变链菌鉴定结果
• 1.2.2 涂片鉴定
• 1.2.3 常规生化鉴定
• 1.2.4 菌膜的初步培养
• 1.3 讨论
• 1.4 小结
• 二、htrA及clpP基因缺陷对变异链球菌生长影响的初步研究
• 2.1 对象和方法
• 2.1.1 菌株和培养基
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要设备
• 2.1.4 实验方法
• 2.1.5 统计学分析
• 2.2 结果
• 2.2.1 四种菌株分别在葡萄糖和蔗糖作为碳源的条件下的生长曲线
• 2.2.2 四种菌株在生长过程中分别对蔗糖和葡萄糖的消耗情况
• 2.3 讨论
• 2.4 小结
• 三、变链菌的htrA和clpP基因对其生长和饥饿耐受的影响
• 3.1 对象和方法
• 3.1.1 菌株和培养基
• 3.1.2 主要试剂
• 3.1.3 主要设备
• 3.1.4 实验方法
• 3.1.5 统计学分析
• 3.2 结果
• 3.2.1 两种菌株分别在含1%葡萄糖及不含碳源条件下的生长情况
• 3.2.2 两种菌株在含葡萄糖培养基中生长时消耗葡萄糖的情况
• 3.3 讨论
• 3.4 小结
• 结论
• 参考文献
• 发表论文和参加科研情况说明
• 附录
• 综述
• 酪蛋白裂解酶P对变异链球菌致龋性的影响
• 综述参考文献
• 致谢