论文摘要
目的：通过体外实验观察βarrestin2的小分子干扰RNA（small interferingRNA, siRNA）对人乳腺癌Bcap37细胞株的增殖及凋亡的影响，探讨βarrestin2基因被干扰后与Bcap37细胞增殖及凋亡的关系，探讨βarrestin2与NF-κB及细胞凋亡之间的关系，为乳腺癌的基因靶向治疗及肿瘤药物开发寻找一定的理论依据。方法：查阅资料找出已被先前认证的有效的βarrestin2的干扰序列，找到后按照此靶序列设计载体，βarrestin2的干扰载体PGPU6/GFP/Neo-βarrestin2真核表达载体的构建交上海吉玛制药技术有限公司完成。进行人乳腺癌细胞株Bcap37细胞的培养，待形成稳定的细胞株后在脂质体lipofectamine2000的介导下转染PGPU6/GFP/Neo-βarrestin2真核表达载体到Bcap37细胞，同时设阴性对照及空白对照组。转染后用G418进行阳性克隆筛选，成功后用RT-PCR，Western blot分别检测Bcap37细胞中的βarrestin2的mRNA及蛋白质的表达情况，分别从mRNA水平及蛋白质水平检测βarrestin2被干扰的效果。证明干扰有效后，用MTT法检测βarrestin2被干扰后的Bcap37细胞的增殖情况，用细胞凋亡试剂盒的方法来观察Bcap37细胞的βarrestin2基因被干扰后的凋亡情况。结果：查阅大量资料后找到了可以干扰βarrestin2基因的有效序列，上海吉玛制药技术有限公司成功地完成了该真核表达载体的构建，测序结果正确。Bcap37细胞培养顺利，用G418进行阳性克隆筛选，证明转染成功。用RT-PCR，Western blot分别检测Bcap37细胞中βarrestin2mRNA及蛋白质的表达情况表明本实验所用的RNA干扰技术成功地抑制了βarrestin2基因的表达。MTT法测定结果表明βarrestin2-siRNA组的增殖速率明显慢于阴性对照组及空白对照组（p<0.05），细胞凋亡试剂盒的结果表明βarrestin2-siRNA组的凋亡细胞数明显多于阴性对照组及空白对照组，两个结果均证明了βarrestin2基因被干扰后可以影响Bcap37细胞的生长。结论：本研究表明本次所使用的βarrestin2的干扰序列能够有效抑制βarrestin2基因的表达，证明了人乳腺癌Bcap37细胞中的βarrestin2基因被抑制后可影响细胞的生长，即βarrestin2基因可能为人乳腺癌Bcap37细胞的拮抗凋亡因子。本次研究为人乳腺癌的基因治疗及肿瘤药物的开发提供了一定的理论依据，βarrestin2基因有可能成为基因靶向治疗的一个新靶点。