多糖抑制胃癌细胞机制及荧光PCR分析apoE基因型

论文摘要

1、以培养的人胃癌SGC7901细胞为对象,研究了用多糖处理后培养细胞的变化特征。结果显示,多糖可以抑制人胃癌SGC7901细胞的增殖,并呈现出对剂量和时间的依赖性。用10mg/mL的多糖处理培养细胞48h后,出现典型的形态学凋亡现象,和明显的DNA片段化,细胞凋亡率达到40%左右。随着细胞凋亡的发生,BCL-2蛋白的表达下降,而BAX蛋白的表达上升。因此,结果表明多糖可以通过诱导细胞发生凋亡来抑制人胃癌SGC7901细胞的生长,从而达到治疗胃癌的目的。2、建立实时荧光PCR扩增反应进行apoE单核苷酸多态性（SNP）分析的方法,快速检测人载脂蛋白E（apoE）等位基因。以人apoE基因中的Cys112Arg为研究对象,使用荧光染料SYBR GreenⅠ标记PCR产物,通过熔解曲线来分析结果,并进行SNP分型。同时,采用高保真DNA聚合酶以提高SNP测定的特异性,通过DNA测序来验证荧光定量PCR对apoE基因Cys112Arg分型结果的准确性。每个样品设立2个检测管,利用下游引物P2和SNP检测引物P33、P44进行定量PCR反应,30份样品各自分别获得两种等位基因扩增产物的熔解曲线,通过熔解曲线的Tm值判读,在30份样本中,apoE基因型3/3、3/4分别有27例和3例,其结果与PCR-RFLP及DNA进行测序结果一致。建立的apoE等位基因分型方法操作简便,结果准确,适合人外周血apoE等位基因的定性检测。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一部分 多糖对人胃癌SGC7901 细胞生长抑制的研究
• 第1章 绪论
• 1.1 细胞凋亡与肿瘤研究进展
• 1.2 细胞凋亡的检测方法
• 1.2.1 形态学视察方法
• 1.2.2 琼脂糖凝胶电泳检测DNA片段化
• 1.2.3 ELISA法
• 1.2.4 流式细胞仪检测方法
• 1.3 多糖生物学功能研究进展
• 1.4 本文研究的目的和主要内容
• 1.4.1 研究目的
• 1.4.2 主要研究内容
• 第2章 多糖对人胃癌细胞株 SGC7901 细胞凋亡的影响及其机制研究
• 2.1 实验材料、试剂及仪器
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 主要试剂
• 2.1.3 主要仪器
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 细胞培养
• 2.2.2 药物的配置
• 2.2.3 多糖对细胞增殖的影响
• 2.2.4 细胞形态学观察
• 2.2.5 DNA ladder
• 2.2.6 流式细胞仪检测细胞凋亡
• 2.2.7 Western blotting 检测 BCL-2、BAX 表达变化
• 2.2.8 统计学处理
• 2.3 结果
• 2.3.1 多糖对细胞增殖的影响的结果
• 2.3.2 形态学观察结果
• 2.3.3 DNA 电泳结果
• 2.3.4 API 测定凋亡率的结果
• 2.3.5 Western 结果
• 2.4 讨论
• 2.5 本章小结
• 结论
• 第二部分 应用实时荧光PCR 法分析apoE3、4 等位基因
• 第1章 绪论
• 1.1 ApoE 基因多态性
• 1.2 ApoE 蛋白研究
• 1.3 ApoE 生理功能
• 1.4 ApoE 的临床意义
• 1.4.1 ApoE 基因与血脂
• 1.4.2 与 AD 的关系
• 1.4.3 ApoE 与冠心病（CHD）的关系
• 1.5 研究现状
• 1.5.1 基因分型技术
• 1.5.2 各基因型与疾病关系
• 1.6 荧光定量 PCR 简介
• 1.7 本文研究的目的和主要内容
• 1.7.1 研究目的
• 1.7.2 主要研究内容
• 第2章 实时荧光定量PCR 法分析apoE3、4 等位基因
• 2.1 实验材料、试剂及仪器
• 2.1.1 材料
• 2.1.2 主要试剂及配方
• 2.1.3 主要仪器
• 2.1.4 PCR 引物
• 2.2 实验方法
• 2.2.1 RFLP-PCR 法基因分型
• 2.2.2 E4/4 的PCR 扩增
• 2.2.3 重组体构建
• 2.2.4 常规PCR条件的优化
• 2.2.5 荧光定量PCR的条件
• 2.3 结果
• 2.3.1 从大量血样中筛选 E3/3 和 E4/3 型
• 2.3.2 构建E3/3和E4/4纯合子结果
• 2.3.3 选择定性的特异性引物的结果
• 2.3.4 标准曲线的建立
• 2.3.5 荧光定量 PCR 检测样本 SNP 的结果
• 2.4 讨论
• 2.5 本章小结
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 附录A （攻读学位期间所发表的学术论文目录）