小鼠胚胎冻前和冻后分割效果的比较研究

论文摘要

本文主要就不同分割液、培养液、分割处理方法及不同的冷冻保护液和的冷冻处理方法对小鼠桑椹胚和囊胚的影响进行了系统的研究。结果如下:1首先研究了不同的分割液和不同胚胎发育阶段对分割效果的影响,发现在12.5%蔗糖分割液中分割桑椹胚时,分割成功率显著高于m-PBS处理组（60.83% vs 51.67%,P<0.05 ）,而分割囊胚时两分割液之间无显著性差异（P >0.05 ）;在m-PBS中分割囊胚和桑椹胚,其成功率前者显著高于后者（70.37%vs 51.67%,P<0.01）,但是在12.5%蔗糖分割液中分别对囊胚和桑椹胚进行分割时,两者无显著性差异（P>0.05）。2无论是桑椹胚还是囊胚,其半胚经不同培养液m-PBS和TCM-199-Hepes培养后存活率差异均不显著（62.50% vs 63.64%;80.36% vs 82.76%,P>0.05）;桑椹胚和囊胚分割后的半胚经m-PBS培养液培养后,所得半胚存活率两者间差异显著（62.50% vs 80.36%,P<0.05）,经TCM-199-Hepes培养液培养后,所得半胚存活率两者间差异显著（63.64% vs 82.76%,P<0.05）。3桑椹胚去致密化后,其分割成功率显著高于未处理组（73.08% vs 51.92%,P<0.01）,半胚培养后的囊胚发育率也显著高于未处理组（71.15% vs 46.15%,P<0.01）。4半胚经琼脂包埋后,利用VSⅠ和VSⅡ冷冻液进行OPS法玻璃化冷冻,解冻后其存活率均显著高于未处理组（90.16% vs48.28%;88.52% vs 44.83%,P<0.01）,培养48h后的半胚发育率,处理组也均显著高于未处理组（61.82% vs 25.86%;61.11% vs 24.13%,P<0.01）。琼脂包埋组解冻后的半胚存活数和发育率,VSⅠ和VSⅡ之间差异均不显著（90.16% vs 88.52%;61.82% vs 61.11%,P>0.05）;未包埋组解冻后VSⅠ和VSⅡ之间差异也均不显著（48.28% vs 44.83%;25.86% vs 24.13%,P>0.05）。5桑椹胚和囊胚分别经两种不同保护液（VSⅠ和VSⅡ）冷冻后形态良好率差异均不显著（96.94% vs 95.96%;86.87% vs 84.38%,P>0.05）;经VSⅠ保护液冷冻后,桑椹胚和囊胚之间形态良好率差异非常显著（96.94% vs 86.87%,P<0.01）,经VSⅡ保护液冷冻后,两者之间形态良好率差异也极显著（95.96% vs 84.38%,P<0.01）。6小鼠胚胎经分割后冷冻,其平均存活率为40.48%,经冷冻后分割的平均存活率为81.63%,两者之间差异非常显著（P<0.01）。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 文献综述
• 1、哺乳动物胚胎冷冻保存技术研究进展
• 1.1 胚胎细胞冷冻损伤的学说
• 1.2 冷冻保护剂
• 1.3 胚胎冷冻保存方法
• 1.4 超低温冷冻保存的发展前景
• 2、哺乳动物胚胎分割技术研究进展
• 2.1 胚胎分割的研究现状
• 2.2 胚胎分割的方法
• 2.3 影响分割胚发育的因素
• 2.4 胚胎分割技术存在的问题及发展前景
• 3、本研究的目的和意义
• 材料与方法
• 1、实验材料
• 1.1 实验动物
• 1.2 主要实验试剂
• 1.3 主要实验仪器
• 1.4 实验试剂的配制
• 1.5 拉细开口型细管（Open Pulled Straw,OPS）的制作
• 1.6 小鼠桑椹胚和囊胚的采集和培养
• 2、实验方法
• 2.1 桑椹胚和囊胚分割后冷冻
• 2.2 桑椹胚和囊胚冷冻后分割
• 2.3 体外培养半胚的发育能力判定
• 2.4 数据分析
• 结果
• 1、桑椹胚和囊胚分割后冷冻的结果
• 2、桑椹胚和囊胚冷冻后分割的结果
• 3、桑椹胚冻前和冻后分割的比较结果
• 讨论
• 1、分割液对胚胎分割效果的影响
• 2、胚胎发育阶段对胚胎分割效果的影响
• 3、去致密化对桑椹胚分割效果的影响
• 4、培养液对半胚体外发育的影响
• 5、不同冷冻保护剂及处理方法对半胚冷冻效果的影响
• 6、不同冷冻保护剂对桑椹胚和囊胚冷冻效果的影响
• 7、分割对冷冻后桑椹胚和囊胚体外发育的影响
• 8、冻前和冻后分割对小鼠桑椹胚和囊胚体外发育的影响
• 结论
• 参考文献
• 附录
• 致谢
• 硕士期间发表的论文