盆腔器官脱垂患者及对照者阴道组织蛋白质组的比较研究

论文摘要

【目的】建立盆腔器官脱垂（pelvic organ prolapse, POP）患者及非脱垂对照者阴道组织蛋白质的双向凝胶电泳图谱,并结合质谱技术分析其差异表达蛋白质,寻找POP疾病相关蛋白,以进一步阐明POP的发病机制。【方法】1、收集绝经后的、年龄相匹配的POP组和对照组手术中取得的尿道周围阴道壁组织标本各10例,置于-80℃超低温冰箱保存。2、提取组织总蛋白,进行双向凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）得到凝胶图谱,采用ImageMaster5.0 2D图象分析软件进行匹配和差异分析,识别两组之间差异表达蛋白点。3、将部分差异蛋白点进行胶内原位酶解后进行MALDI-TOF-MS分析,获取肽质量指纹图谱,数据库搜索鉴定蛋白质。【结果】得到了分辨率较高,重复性较好的POP组和对照组阴道壁组织的双向凝胶电泳图谱。POP组凝胶的平均蛋白质点数为871±96个,正常对照组平均蛋白质点数为856±89个。凝胶上的蛋白质点在位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦方向上的偏差为（1.73±0.18）mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为（1.87±0.22）mm;比较POP组及对照组阴道组织的双向凝胶电泳图谱,未匹配点数为109±15个,差异表达蛋白质点数为27个,其表达水平相差两倍以上。选取其中8个具有明显差异的蛋白点进行质谱鉴定,初步鉴定出5种蛋白质。分别是角蛋白13、角蛋白1、transgelin、cysteine and glycine-rich protein 1（CRP1）和T-bet。其中transgelin和CRP1仅在POP组表达;T-bet仅在对照组中检测到;角蛋白13和角蛋白1在POP组中的表达量相对于对照组降低6倍以上。【结论】1、运用双向凝胶电泳结合质谱技术研究POP疾病相关蛋白是可行的。2、角蛋白13和角蛋白1在POP患者阴道组织中表达显著下调提示POP患者阴道上皮层的分化受抑制,导致阴道上皮层变薄,影响阴道壁的支撑作用,因而易发生POP。3、transgelin仅在POP组阴道组织中表达而不表达于对照组;结合以往研究中的结果:POP患者阴道组织中Ⅲ型胶原含量增高。推测是因为transgelin抑制MMP-9对Ⅲ型胶原的分解,导致阴道组织中Ⅲ型胶原堆积,POP患者阴道组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原比例失衡,最终导致组织抗拉强度变弱,从而发生脱垂。4、CRP1是肌分化重要的正性调节物,CRP1在POP患者阴道组织中高表达而不出现于对照组中,可能与阴道平滑肌组织受损后代偿性修复有关。5、T-bet仅在对照组中表达,POP组患者中未检测到,推测可能致使POP患者阴道组织免疫防御功能减弱,易受病原体侵犯而加重阴道组织结构的破坏。

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