微囊化许旺细胞移植脊髓损伤大鼠bFGF表达及后肢运动功能变化

论文摘要

目的：细胞移植是目前脊髓损伤治疗的重要研究方向。在脊髓半横段损伤后的大鼠,移植具有免疫隔离效应的兔许旺细胞微囊,通过观察大鼠碱性成纤维细胞生长因子表达及后肢运动功能的变化,探讨微囊化许旺细胞移植对脊髓再生的影响。方法：在无菌条件下,取家兔坐骨神经用双酶消化法制成许旺细胞悬液后,再用气体喷入法制成许旺细胞微囊。同法制备不包被许旺细胞的空囊。80只SD大鼠随机分为4组：细胞组(N=25)、空囊组(N=25)、微囊组(N=25)和正常组(N=5)。其中,前三组建立第10胸椎脊髓右半横断损伤模型,分别于损伤处植入明胶海绵吸附的10μL许旺细胞悬液(细胞组)、10μL空囊(空囊组)、10μL许旺细胞微囊(微囊组)；正常组不做任何干预。采用BBB评分测定大鼠后肢运动功能恢复情况和制作脊髓石蜡切片观察实验动物。术后第1、3、7、14、28 d大鼠4%多聚甲醛灌注后,细胞组、空囊组、微囊组截取损伤平面脊髓；正常组取相应部位脊髓,四组大鼠脊髓组织均制成常规石蜡切片。切片通过HE染色和尼氏染色行病理学检查,并做免疫组织化学染色,结合图像分析观察碱性成纤维细胞生长因子在脊髓损伤部位的表达变化。结果：造模后大鼠右后肢即刻出现瘫痪,BBB评分为O。术后随时间延长各组动物后肢运动功能均有不同程度的恢复,但都未达到正常水平。移植后第7、14、28天微囊组大鼠后肢运动功能恢复较快,BBB评分优于细胞组和空囊组(P<0.05或P<0.01)。病理学检查,移植后第3天,各组脊髓损伤区有大量巨噬细胞和白细胞浸润,同时胶质细胞增生,但与细胞组、空囊组比较,微囊组细胞浸润程度较轻,胶质细胞增生明显。材料移植后第7天,微囊组大量胶质细胞增生,已无白细胞和巨噬细胞浸润,而细胞组、空囊组仍有白细胞和巨噬细胞浸润。碱性成纤维细胞生长因子阳性细胞表达主要见于神经元细胞的胞浆和胶质细胞的胞核内。移植后第1、3、7天,胶质细胞主要在脊髓损伤附近处表达,其中第3天表达量最大；第14天在神经元细胞的胞浆内可见碱性成纤维细胞生长因子表达,微囊组表达程度明显高于细胞组和空囊组(P<0.01)；第28天各组表达程度均明显下降。结论：微囊化兔许旺细胞移植于损伤大鼠脊髓后,可以抑制异种移植后免疫排斥,减轻炎症反应,增加碱性成纤维细胞生长因子表达,促进后肢功能恢复和脊髓再生

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 主要试剂和仪器
• 2.2 实验方法
• 2.3 统计学处理
• 第3章 结果
• 3.1 移植物的制备情况
• 3.2 动物模型
• 3.3 脊髓组织石蜡切片Nissl和HE染色
• 3.4 脊髓切片的bFGF免疫组织化染色
• 3.5 行为学观察
• 第4章 讨论
• 4.1 脊髓损伤与移植
• 4.2 许旺细胞与脊髓损伤
• 4.3 bFGF概况
• 4.4 bFGF与脊髓损伤
• 4.5 微囊化技术
• 4.6 微囊化许旺细胞移植治疗急性脊髓损伤的可能机制
• 第5章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 实验不足之处及进一步工作的方向
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 攻读学位期间的研究成果
• 附带综述