人类白细胞抗原-G在急性白血病中的表达及意义

论文摘要

研究背景及目的白血病是一种严重威胁人类生命的恶性肿瘤,其中急性白血病居35岁以下成人肿瘤死因的首位。近年来随着高分辨多参数流式细胞术的广泛应用和血液恶性肿瘤细胞免疫表型检测的大力开展,以及染色体核型分析、FISH等技术发展与应用,人们对白血病诊断与治疗越来越明确化、精确化,从形态学、免疫学、细胞遗传学、分子生物学水平上对白血病进行诊断、分型和评价预后,但限于对特异性系列分化抗原及其单克隆抗体的研究还不够深入。人类MHC,又称人类白细胞抗原（HLA）,位于第六号染色体短臂,是一群高度多态性的紧密连锁基因群。HLA-G属于非经典HLA-I类分子,主要参与母胎免疫耐受的形成。HLA-G分子呈低限制多态性,进化保守,在健康组织中有限的表达,具有免疫调节性。正常生理条件下,其产物表达在一些免疫赦免区,如母胎交界面、胸腺髓质间上皮细胞以及眼球角膜等部位。不同病理条件下,如肿瘤、病毒侵染细胞、皮肤炎症期间或器官移植物功能良好的情况下,在组织中的表达可以上调。尚可在肾癌、乳腺癌、肺癌、白血病、神经间质瘤、早期皮肤淋巴瘤、黑色素瘤患者样本中检测到。HLA-G作为新的免疫抑制分子在妊娠免疫、肿瘤免疫逃逸及实体器官移植等方面已有广泛研究,并对其在诱导免疫耐受机理进行了初步探讨：抑制CD8+T细胞和自然杀伤（Natural killer,NK）细胞杀伤活性、抑制CD4+T细胞增殖、抑制异源性反应T细胞增殖周期、影响抗原提呈细胞的成熟和功能、诱导调节性T细胞（Regulatory T cells, Treg细胞）形成、调节细胞因子分泌等。因HLA-G与免疫耐受密切相关,在抗肿瘤免疫效应中也可能起着重要的作用。本研究通过检测急性白血病患者体内HLA-G和瘤细胞的表达情况,分析初发白血病患者以及难治复发白血病患者治疗（化疗）前后HLA-G的表达差异和变化,探讨HLA-G表达水平的变化与急性白血病发生发展机制的相关性及其对于白血病诊断、病情评估与预后评价的意义。方法采集50例白血病患者外周血样进行研究,10例健康人外周血样作为对照。流式细胞术检测健康人、急性白血病初发患者治疗前后及复发患者外周血膜结合型HLA-G （Membrane-bound Human leukocyte antigen-G, mHLA-G）表达；酶联免疫吸附试验（Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测外周血血浆分泌型HLA-G （Secretory Human leukocyte antigen-G, sHLA-G）和TGF-β（转化生长因子-β）、IL-10（白介素-10）含量；Real-time PCR检测白血病患者外周血单个核细胞HLA-G1、HLA-G5的nRNA表达水平。数据统计分析：采用SPSS 13.0统计软件包进行处理,以均数±标准差（x±s）表示,治疗前后两组间比较采用两独立配对样本t检验；符合正态分布和方差齐性时用单因素方差分析（ONE-WAY ANOVA）,进一步组间多重比较采用LSD法。不满足方差齐性用Welch法对F值进行校正,进一步多重比较用Dunnett T3法。P<0.05为差异有统计学意义。结果1、sHLA-G水平：健康人sHLA-G血浆中的水平为5.87±2.07ng/ml,急性白血病初发患者为10.05±6.58 ng/ml,难治复发患者为12.32±5.85 ng/ml,初发、复发组sHLA-G水平均显著高于正常健康人组,差异有显著性意义（P<0.05）；白血病CR患者化疗前后sHLA-G水平分别为9.10±4.34 ng/ml与4.74±1.73ng/ml,化疗前明显高于化疗后（P<0.05）；未缓解（NR）患者化疗前后sHLA-G水平分别为10.10±7.72 ng/ml和9.29±0.56ng/ml,化疗前后sHLA-G水平比较无统计学差异（P>0.05）。化疗后NR组sHLA-G水平明显高于CR组,差异有统计学意义（P<0.05）。2、mHLA-G水平：健康人mHLA-G的水平为0.29%±0.20%、急性白血病初发患者为0.60±0.44%、难治复发患者为0.77±0.41%,初发、难治复发患者mHLA-G水平均显著高于健康人（P<0.05）；白血病CR患者前后分别为1.03±0.50%和0.31±0.17%,化疗前mHLA-G水平明显高于化疗后组（P<0.05）；未缓解（NR）患者化疗前后分别为0.81±0.23%和0.88±0.27%,化疗前后两组无统计学差异（P>0.05）。化疗后NR组mHLA-G水平明显高于CR组,差异有统计学意义（P<0.01）。3. HLA-G mRNA表达水平：初发患者HLA-G5的mRNA表达水平明显高于健康人,差异有显著性意义（P<0.05）；白血病CR患者化疗前HLA-G5的mRNA表达水平明显高于化疗CR后,差异有显著性意义（P<0.05）；初发患者HLA-G1的mRNA表达水平与健康人组无明显差别,差异无统计学意义（P>0.05）；CR和NR组患者患者化疗前后HLA-G1的mRNA水平均无明显差别,差异无意义（P>0.05）。化疗后NR与CR组的HLA-G1 mRNA水平无明显差别,差异无意义（P>0.05）；而化疗后NR组的HLA-G5 mRNA表达水平明显高于CR组,差异有统计学意义（P<0.01）。4.不同FAB分型对HLA-G表达的影响：各种分型患者mHLA-G、sHLA-G、HLA-G mRNA表达均无明显差别,差异无意义（P>0.05）5、细胞因子水平与HLA-G的相关性：急性白血病初发患者CR组TGF-β水平显著低于正常人组,差异有显著性意义（P<0.01）；IL-10水平显著高于正常人组,差异有显著性意义（P<0.01）；CR组化疗后TGF-β、IL-10表达水平与治疗前有显著差异,差异有统计学意义（P<0.01）。NR组化疗后TGF-β和IL-10表达与化疗前均无统计学差异（P>0.05）。化疗后NR组IL-10、TGF-β表达水平明显高于CR组,差异有显著性意义（P<0.01）。初发急性白血病患者外周血中sHLA-G的表达与TGF-β有显著负相关关系,而复发患者sHLA-G的表达与TGF-β无明显相关性；CR组与NR组治疗前后外周血sHLA的表达与TGF-β均未见明显相关性。初发急性白血病患者外周血中sHLA-G的表达与IL-10有显著正相关关系,而复发患者sHLA-G的表达与IL-10无明显相关性；CR组与NR组治疗前后外周血sHLA的表达与IL-10均未见明显相关性。结论急性白血病患者无论是处于初发还是难治复发状态,外周血中HLA-G的表达水平显著升高,提示HLA-G可能抑制白血病状态下肿瘤免疫功能,亦可能参与急性白血病的发生发展。治疗后CR患者sHLA-G和mHLA-G的表达以及HLA-G5的mRNA表达水平均较治疗前明显降低,而NR患者治疗前后sHLA-G和mHLA-G的表达未有明显变化,治疗后维持着治疗前的高表达状态,提示监测sHLA-G和mHLA-G的表达情况对于急性白血病病情监测和疗效评估可能有着重要作用和指导意义。初发急性白血病患者外周血中sHLA-G的表达与TGF-β有显著负相关关系,而与IL-10有显著正相关关系,提示在初发急性白血病患者中TGF-β和IL-10等细胞因子与HLA-G之间存在着交互作用,参与急性白血病的发病机理。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 材料与方法
• 1.1 材料
• 1.2 主要实验方法
• 1.3 统计学分析
• 结果
• 2.1 健康人、急性白血病初发、复发难治患者HLA-G（sHLA-G和mHLA-G）表达情况
• 2.2 定量分析sHLA-G和mHLA-G的表达水平
• 2.3 HLA-G表达与疗效和难治复发的关系
• 2.4 急性白血病类型（FAB分型）与HLA-G表达的关系
• 2.5 HLA-G与细胞因子的关系
• 讨论
• 3.1 HLA-G与肿瘤免疫的研究概况
• 3.2 HLA-G在急性白血病发生发展中的作用
• 3.3 急性白血病状态下HLA-G与细胞因子的关系
• 结论
• 参考文献
• 缩略词中英文对照表
• 致谢
• 统计学证明