论文摘要
同科植物化学成分的相似性对于研究植物的化学成分有着重要的指导意义,西洋参（Panax quinquefolium L.）原产于美国,与人参（panax ginseng C.A.Meyer）同科同属,但是西洋参的化学及药理作用研究却没有人参那样透彻。本实验以深入研究西洋参的非皂苷类成分,研发抗氧化、抗衰老的药物为目的,对西洋参中美拉德反应中间产物一精氨酸单糖苷（AF）、精氨酸双糖苷（AFG）和游离氨基酸进行提取、分离、定量研究,为深入探讨植物体内美拉德反应的机理做铺垫。本实验采用异硫氰酸苯酯柱前衍生反相高效液相色谱同时测定了西洋参中17种游离氨基酸,以正亮氨酸为内标,异硫氰酸苯酯为柱前衍生试剂,Venusil-AA氨基酸分析专用柱（5μm,4.6mm×250mm）,醋酸钠缓冲溶液（pH6.5）-乙腈溶液和80%乙腈水溶液为流动相,采用梯度洗脱,流速:1mL/min,柱温:40℃,紫外检测器在254nm波长处检测。氨基酸浓度在0.5μmol～0.0125μmol范围内,线性相关系数均大于0.99。17种氨基酸的平均回收率在96.5%～102.3%。该方法灵敏、准确,可作为测定植物中氨基酸的有效方法,测定结果表明:西洋参根中的游离氨基酸主要以精氨酸为主,占游离氨基酸总量50%以上。游离精氨酸的大量存在是精氨酸衍生物产生的物质基础,这一结果为进一步研究西洋参中的精氨酸衍生物提供了前提条件。在前人研究基础上建立了新的分离体系,采用有机溶剂提取、大孔吸附树脂层析、Sephadex LH-20柱层析、硅胶湿柱层析的方法首次从西洋参干燥根中分离得到L-精氨酸、AF和AFG,丰富了西洋参的化学成分,分离采用常规柱填料,步骤简单,时间短,为后人在美拉德反应产物的纯化方面提供了借鉴之处。建立了反相高效液相色谱法测定西洋参中精氨酸衍生物的分析方法,测定并比较了西洋参新鲜植株不同部位和干燥根中精氨酸衍生物的含量,结果表明干燥根,新鲜根及果中均含有AF和AFG,其中所含AF的含量均大于AFG的含量。应用均匀设计优化AF的合成工艺,Excel软件统计分析,结果表明最佳工艺AF转化率可达50%,分离系统采用硅胶湿柱,70%乙醇等度洗脱,简化了分离纯化工艺,使大量制备AF成为可能。本实验通过对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟自由基三种自由基清除作用的研究表明,L-Arg、AF、AFG及其总合成物都有一定的清除自由基能力,其中AF及其总合成物的清除能力最强。此外采用Cu2+诱导小牛血清脂蛋白氧化模型,研究精氨酸衍生物对牛血清脂蛋白氧化修饰的抑制作用,结果表明AF、AFG总合成物能够减少小牛血清脂蛋白氧化损伤,并成剂量关系。为全面认识精氨酸衍生物的生物学作用,研制与开发新一类抗衰老药物打下基础。