论文摘要
使用无血清培养液来进行卵母细胞的体外成熟培养和胚胎的发育培养,尽管近年来有人在不断尝试,但是还存在一定的要改进的地方。本实验将屠宰后延边黄牛的卵巢从屠宰场取回,用手术剪刀将多余组织剪掉,之后用温度为38℃的生理盐水洗净,采用抽吸法回收卵母细胞,在不同的无血清成熟液条件下进行卵母细胞的体外成熟培养,然后对成熟卵母细胞进行核移植、融合、激活以及胚胎的体外培养。实验分别对牛卵泡液（BFF,bovine follicularfluid）、聚乙烯醇（PVA,polyvinyl alcohol）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP,polyvinylpyrrolidone）、牛血清白蛋白（BSA,bovine serum albumin）等无血清成熟液进行了研究。得出的实验结果如下:1、在不同浓度的牛卵泡液对卵母细胞体外成熟及发育率的影响的实验中,添加10%BFF时的成熟率、卵裂率、4-6细胞发育率和8-16细胞发育率都要高于其他组,结果显示10%BFF是添加卵泡液的最佳浓度。2、在BFF是否灭活对卵母细胞体外成熟及发育率的影响的实验中,在成熟上没有显著差异;但是在卵裂率上差异显著。结果表明:卵泡液虽然可以代替血清,但是像血清一样灭活以后使用是没有必要的。3、在PVA的浓度对卵母细胞体外成熟及发育率的影响的实验中,成熟率1.0 mg/ml组最高,但和1.5mg/ml组之间没有差异,1.0mg/ml组在早期发育上较其他组要高,PVA的添加量大于1.5 mg/ml时,虽然卵裂,但都为异常胚胎,卵裂率要低于不添加组。所以1.0 mg/ml的PVA是卵母细胞体外成熟的最佳浓度。4、确定了PVA和BFF的最佳浓度后,将二者结合使用,经过PVA和BFF的结合添加,我们得到的结论是:将二者结合添加以后要明显好于不添加组合和单独添加组。5、在不同浓度的PVP对卵母细胞体外成熟及发育率的影响的实验中,经过实验测得:添加0.3%的PVP的成熟率、卵裂率和发育率综合考虑要好于其他组,所以适合卵母细胞体外成熟及发育的PVP的最好浓度是0.3%。6、在不同浓度的BSA对卵母细胞体外成熟及发育率的影响的实验中,经过实验测得:对卵裂率和发育率的影响综合考虑0.4 mg/ml组要好于其他组,但是PVP的浓度对卵母细胞的体外成熟的影响不大。所以适合卵母细胞体外成熟及发育的BSA的最好浓度是0.4mg/ml。7、经过各种无血清成熟液之间的比较的得到的结果是:成熟率各组之间没有差异,表示几种无血清成熟液在卵母细胞体外成熟上可以代替血清。在卵裂率和发育率方面10%BFF+PVA组和血清组没有差异,所以它是代替血清的最佳成熟液。