王巍陈永昌冯芬招丽蓉胡斌林秀强徐绮华林奔广东省佛山市第一人民医院胃肠肿瘤内科广东佛山５２８０００
【摘要】目的探讨佛山地区１１１例接受伊立替康为基础化疗方案的转移性结直肠癌患者UGT１A１?２８基因多态性与不良反应发生率严重程度及疗效的关系.方法对１１１人结直肠癌患者,进行UGT１A１?２８基因多态性检测,分析不同基因型的不良反应发生情况,化疗疗效的异同,分析不同基因型患者使用伊立替康后Ⅲ度以上不良反应发生率的差异.结论１１１例转移性结直肠癌患者中UGT１A１基因启动子区TA序列６次重复的纯合野生型TA６/６有７６例(６８．４％);基因型为TA序列６次和７次重复的杂合型TA６/７有３２例(２８．８％),基因型TA序列７次重复的纯合突变型TA７/７有３例(２．８％).TA６/６中出现３－４度腹泻１３例(１７．１％);３－４度中性粒细胞减少８例(１０．５％);TA６/７中出现３－４度腹泻４例(１２．５％);３－４度中性粒细胞减少３例(９．３％);TA７/７中出现３－４度腹泻２例(６６．７％),３－４度中性粒细胞减少２例(６６．７％).结论TA７/７纯合变异型频率极低,应用伊立替康化疗发生３－４度腹泻及中性粒细胞减少的风险增加,达统计学意义,而TA６/７杂合子与TA６/６野生型３－４度腹泻及中性粒细胞减少风险相似,对野生型TA６/６或甚至TA６/７者,选择合适患者适当增加伊立替康剂量以提高疗效,值得进一步深入研究.【关键词】伊立替康;不良反应;UGT１A１:基因多态性【中图分类号】R７３５【文献标识码】B【文章编号】１００８－６３１５(２０１５)１２－０６３０－０１
伊立替康是喜树碱同源化合物,经特殊设计以利其经肝的羧酸酯酶转化成活性代谢产物７－乙基－１０－羟基喜树碱(SN－３８)发挥作用,SN－３８是拓扑异构酶Ⅰ强抑制药,伊立替康是目前治疗转移性结直肠癌(metastaticcolonＧrectalcancermCRC)有效药物之一,以其为基础的化疗方案可显著的提高患者的无进展生存(Progression－FreeSurvivalPFS)及总生存时间(OverallSurvivalOS)[１].为了进一步了解佛山地区UGT１A１多态性的分布情况、了解UGT１A１多态性与其腹泻、中性粒细胞减少的关系,从而进一步探讨基因多态性指导个体化治疗的临床意义,我们对我院１１１位进展期消化道肿瘤患者进行UGT１A１?２８基因多态性检测,并对采用含伊立替康方案化疗的转移性结直肠癌(mCRC)患者副反应发生情况进行分析.
１资料和方法
１．１资料收集佛山市第一人民医院自２０１２年９月至２０１４年１１月,病理学及影像学确诊的转移性结直肠癌患者１１１例,ECOG评分为０－１分;中性粒细胞≥１．５×１０?９/L,血小板＞８０×１０?９/L;ALT和AST≤２．５倍正常值(有肝脏转移者≤５倍正常值);肌酐≤２．５倍正常值.其中男性７０例、女性４１例;FOLFIRI组８９例、XELIRI组２２例;靶向药物＋FOLFIRI方案７例,靶向药物＋XELIRI方案４例.１．２研究方法
１．２．１DNA提取、PCR反应和序列分析全部受试者均取外周静脉血２mL,EDTA抗凝,采用QiagenDNA抽提试剂盒提取基因组DNA;PCR扩增UGT１A１基因的相应片段:?２８位点上游引物:５－TCCCTGCTACCTTTＧGTGGAC－３,下游引物:５－AGCAGGCCCAGGACAAGT－３.?６位点上游引物:５－TCCCTGCTACCTTTGTGGAC－３,下游引物:５－AGCAGGCＧCCAGGACAAGT－３.每个２５μl的PCR反应,包括１０×buffer,２．５mMdNTP,３０ng模板DNA,１０μM上下游引物各０．５μl.PCR反应条件为,初始变性９４°C５min;变性９４°C３０s,退火３０s,延伸６８°C１min,３５个循环;７２°C延伸７min.PCR产物采用BigDyeTeminatorV３．１标记并纯化后,应用ABI－３７３０测序仪双向测序分析PCR产物,Polyohred５．０４对所得SNP进行检测分析,全部SNP在Chromas２．３１软件显示并经人工校读.１(．２．２评价标准不良反应按美国国立癌症研究所事件通用术语标准３．０NationalCancerInstitute－CommonTerminologyCriteriaforAdverseEvents３．０,NCI－CTC３．０),分０－４级.
１．２．３统计学方法运用SPSS１６．０软件进行统计学分析,计数资料采用χ２检验,计量资料采用均数标准差,组间比较采用t检验,P＜０．０５为差异有统计学意义.
２结果
２．１UGT１A１?２８基因多态性检测结果共１１１位患者中UGT１A１基因启动子区TA序列６次重复的纯合野生型TA６/６有７６例(６８．４％);基因型为TA序列６次和７次重复的杂合型TA６/７有３２例(２８．８％);基因型TA序列７次重复的纯合突变型TA７/７有３例(２．８％).(表一)
３讨论
研究表明基因遗传的单核苷酸多态性(SingleNucleotidePolymorphismsSNP)[２]可能会影响到某些化疗药物的活化和代谢过程,这促进了恶性肿瘤患者的个体化治疗的研究.葡萄糖醛酸转移酶(UGT１A１)为伊立替康代谢的关键酶,UGTlAl基因启动子区具有多态性,其TATA盒区域包含５－８个TA重复序列,TA重复序列数目的改变影响UGTlAl表达,进而影响伊立替康在体内灭活,与毒副反应的产生相关８目前对UGTlAl基因多态性的分布情况及其基因多态性与伊立替康化疗的毒性反应和疗效反应关系的研究尤为引人关注.国内外陆续有报道提示UGT１A１?２８位点基因多态性对于预测FOLFIRI方案毒性具有一定意义,具有UGT１A１－３１５６G＞A基因型的患者,有５０％在CPT－１１治疗后出现副作用,而带有正常基因型的患者只有１２．５％[３].中国学者徐建明等人[４]的一项临床研究显示,野生基因型TA６/６在中国人中分布频率较高(７２．９％对４５．２％),UGT１A１?２８位点的野生基因型TA６/６患者的２－４度迟发性腹泻发生率低于TA６/７,TA７/７,差异具有统计学意义.综上所述,对于使用伊立替康为为基础化疗方案的转移性结直肠癌患者,野生型TA６/６占大多数,TA６/６和TA６/７患者出现３－４度腹泻及３－４度中性粒细胞减少的风险大致相同;TA７/７患者在中国患者少见,该基因型与较高的伊立替康严重毒性反应有密切关系.根据UGT１A１?２８基因多态性结果,对野生型TA６/６甚至TA６/７患者通过筛查,从而提高伊立替康剂量强度达到提高疗效的目的值得进一步探讨.
参考文献[１]DouillardJY,Cunninghan,RothADetal．IrinotecancombinedwithfluＧorouracilcomparedwithfluorouracilaloneasfirstlinetreatmentformeＧtastaticcolorectalcancer:amulticentrerandomisedtrial[J]．Lancet,２０００,[３５５(９２０９):１０４１－１０４７．２]LechG,SlotwinskiR,KrasnodebskiIW．Theroleoftumormarkersandbiomarkersincolorectalcancer．Neoplasma．２０１３Sep２０．doi:１０．４１４９/[neo_２０１４_００３．[Epubaheadofprint]PubMedPMID:２４０５０５４４．３]CecchinE,etal．PredictiveroleoftheUGT１A１,UGT１A７,andUGT１A９geneticvariantsandtheirhaplotypesontheoutcomeofmetaＧstaticcolorectalcancerpatientstreatedwithfluorouracil,leucovorin,and[irinotecan．JClinOncol．２００９May２０;２７(１５):２４５７－６５．４]王岩,徐建明,沈琳等．中国人尿苷二磷酸葡糖苷酸转移酶１A基因多态性与伊立替康毒性的相关性[J]．中华肿瘤杂志,２００７,２９(１２):９１３－９１６．[５]佛山市科学技术局２０１１年“UGT１A１基因多形性对FOLFIRI方案治疗转移性结直肠癌疗效毒性预测的研究”课题编号:２０１１１０２１０１００３１