内皮素在匹罗卡品致痫大鼠癫痫发作及海马硬化中的作用

论文摘要

目的通过观察经侧脑室注射内皮素受体(endothelin receptor, ETR)拮抗剂对匹罗卡品(pilocarpine, Pilo)致痫大鼠急性癫痫发作及海马硬化(hippocampal sclerosis, HS)的影响,进一步了解内源性内皮素(ET)以及ETR亚型在癫痫发生发展中的作用。方法氯化锂(lithum chloride, LiCl)联合匹罗卡品小剂量3次重复腹腔注射建立大鼠急性癫痫发作模型。在腹腔注射匹罗卡品前,通过立体定位在大鼠左侧脑室内分别注射容积均为1.5μL的生理盐水(NS)(空白对照组,9只；模型组,30只)、特异性内皮素A受体拮抗剂(ETAR)BQ123(15nmol,30只)特异性ETBR拮抗剂BQ788(15nmol,30只1、ETA&BR非特异性拮抗剂PD145065(15nmol,30只)。建立模型后,观察大鼠的急性期行为学、海马组织匀浆ET含量及海马的病理学改变。结果1.空白对照组大鼠未见痫性发作,模型组大鼠有17只(56.7%)出现惊厥性痫性发作(convulsive seizure, CS),其中15只(88.2%)出现癫痫持续状态(status epilepticus, SE)。BQ123及PD145065能显著减少匹罗卡品诱导大鼠CS成功率。BQ788组及PD145065组大鼠匹罗卡品诱导SE发生率显著低于模型组。3个ETR拮抗剂均不影响匹罗卡品诱导大鼠惊厥性痫性发作平均潜伏期。2.模型组CS大鼠7 d时间点海马组织匀浆ET含量显著高于对照组及3个ETR拮抗剂预处理组。3.对照组及各组NCS大鼠海马亚区各时间点未出现明显的神经元脱失(neuron loss)。胶质细胞增生(gliosis)与苔藓纤维发芽(mossy fiber sprouting, MFS)。模型组及3个ETR拮抗剂预处理的4组CS大鼠海马CA1、CA3及hilar区在2d、7 d及28 d时间点出现不同程度的神经元脱失与胶质细胞增生。7d时的神经元脱失及胶质细胞增生最严重。CS大鼠CA3区神经元脱失与胶质细胞增生的程度重于CA1,并且海马锥体细胞层胶质细胞增生与神经元脱失相关。28 d时,4组CS大鼠CA3区出现明显的苔藓纤维发芽。海马内ET免疫组化阳性的细胞主要分布在CA区的锥体细胞层,尤以CA3的锥体细胞含量丰富,广泛散在的胶质细胞未见明显的ET表达。结论1.内源性ET可能通过作用于中枢性ETAR诱导惊厥性行为的产生,并且很可能通过激活ETBR参与癫痫泛化发展过程,内源性ET至少部分参与了匹罗卡品诱导大鼠急性癫痫发作的发生及发展过程。CS是匹罗卡品诱导海马硬化的重要因素,ETR拮抗剂预处理不能直接阻断匹罗卡品致痫大鼠海马硬化的发生。2.匹罗卡品致痫大鼠海马组织匀浆中内源性ET在7d时明显升高。海马内ET免疫组化阳性的细胞主要分布在CA区的锥体细胞层,尤以CA3的锥体细胞含量丰富,广泛散在的胶质细胞未见明显的ET表达。

论文目录

• 中文摘要
• Abstract
• 1 前言
• 1.1 癫痫
• 1.2 颞叶癫痫
• 1.3 海马的解剖结构
• 1.4 海马硬化与颞叶癫痫
• 1.5 内皮素系统与颞叶癫痫
• 1.6 癫痫动物模型
• 1.7 研究目的
• 2 材料与方法
• 2.1 模型制作
• 2.2 Nissl染色、GFAP免疫组化染色及ET免疫组化染色
• 2.3 Neo-Timm染色
• 2.4 放射免疫法检测大鼠海马组织匀浆中内皮素含量
• 2.5 数据收集及统计学处理
• 3 结果
• 3.1 行为学
• 3.2 匹罗卡品致痫大鼠海马组织匀浆ET含量的变化
• 3.3 病理学
• 4 讨论
• 4.1 内源性ET在匹罗卡品诱导大鼠急性癫痫发作的作用
• 4.2 匹罗卡品致痫大鼠海马内源性ET的表达
• 4.3 ETR受体拮抗剂对匹罗卡品致CS大鼠海马硬化的影响
• 4.4 本研究的不足之处与展望
• 5 结论
• 参考文献
• 英文缩略词表
• 在学期间发表论文清单
• 致谢
• 附图1
• 附图2