论文摘要
脊髓性肌萎缩症（spinal muscular atrophy，SMA）是一种常染色体隐性遗传的神经肌肉疾病，其致病基因为运动神经元生存基因（survival motorneuron，SMN），包括SMN1和SMN2，位于5q13。SMA大多数的由于SMN1缺失所致。生长锥是神经元唯一的生长点，它向前牵拉神经突起使其生长变长。生长锥的形态学基础是各种细胞骨架蛋白，F-actin在生长锥的可动性中起关键作用。在细胞分化及移动时，F-actin及纽蛋白（vinculin）协同分布，相互调节以适应细胞形状及功能的变化。目的：观察SMA神经元样细胞（NLCs）内SMN蛋白，F-actin及vinculin的分布、表达的差异，及SMA NLCs突起数目及长度的变化，探讨SMA发病机制。方法：用PCR-RFLP的方法对SMA患者进行基因诊断；分离纯化、鉴定患者和对照者的MSCs，诱导分化并鉴定NLCs；actin用SABC法染色，观察NLCs突起数目和长度；免疫荧光双标技术、共聚焦激光扫描显微术观察SMN与F-actin及vinculin之间的定位关系；RT—PCR检测诱导后fl-SMN mRNA、vinculin mRNA表达，丙戊酸干预后再检测上述指标。结果：1．患者与对照的MSCs形态相同，鉴定证实细胞为MSCs；诱导后的细胞呈典型的NLCs形态，ICT染色显示细胞膜NSE、NF蛋白表达阳性；2．SMA组NLCs较对照组细胞突起个数少于对照组，但无统计学意义（P＞0.05）；细胞突起长度短于对照组（P＜0.05）；观察显示SMN蛋白与F-actin、vinculin有共定位关系；fl-SMN蛋白与F-actin蛋白、fl-SMN蛋白与vinculin在轴突呈不连续的片状分布的融合光；与对照组比较，SMA NLCs的F-actin在轴突分布不均，染色淡；vinculin在核周的分布增加，在细胞突起内的分布变得不连续，呈散在点状。3．SMA组NLCs fl-SMNmRNA表达量低于对照组（P＜0.05）：△7-SMN mRNA、vinculin mRNA表达量两组差异无统计学意义（P＞0.05）；SMA组用丙戊酸干预后，fl-SMN mRNA表达量高于未干预SMA组（P＜0.05）；对照组在干预后fl-SMN mRNA、△7-SMN mRNA的表达水平低于未干预对照组，但差别无统计学意义（P＞0.05）；干预后两组的vinculin mRNA表达水平无明显变化（P＞0.05），且组间无差别（P＞0.05）。结论：SMA中发病机制与vinculin表达量无直接关系，可能与vinculin及F-actin的分布紊乱有关；SMN缺乏导致SMA NLCs突起生长受阻。
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标签：脊髓性肌萎缩症论文; 细胞骨架蛋白论文; 运动神经元生存蛋白论文;