紫杉醇和全反式维甲酸抑制原代培养血管平滑肌细胞增殖的实验研究

论文摘要

背景和目的:目前冠心病（CHD）仍然是危害人类健康的重要疾病之一。CHD 的治疗包括:药物治疗、介入治疗和血管旁路移植术,其中介入治疗得到广泛肯定,但是存在着再狭窄的问题。特别糖尿病患者再狭窄率可达 30-50%,从而使支架的广泛应用在一定程度上受到限制。再狭窄主要是由于血管弹性回缩、负性血管重塑和新生内膜增生等各方面因素的综合作用。而支架内再狭窄主要是由于血管平滑肌细胞（VSMCs）的增生与迁移所致。 因此,VSMCs 增殖抑制剂的研究成为目前热点,从而使药物涂层支架（DES）的研究受到广泛的关注。目前临床上应用的药物涂层支架主要有雷帕霉素涂层支架和紫杉醇涂层支架,即CYPHER 支架和 TAXUS 支架。但这两种 DES 在大规模临床实践中,仍有5-10%的再狭窄率。此外,临床研究发现 CYPHER 支架与 TAXUS 支架相比再狭窄率更低,其可能机制在于紫杉醇抑制 VSMCs 的同时,也抑制了血管内皮细胞的增生,影响内皮的愈合。若能与其他保护内皮细胞同时抑制 VSMCs 增殖的药物合用,降低紫杉醇的浓度,避免对内皮愈合的影响,同时也能更好地抑制 VSMCs 的增殖。目前还没有此方面的报道。研究证明紫杉醇的浓度小于 0.1nmol/l 时对人内皮细胞生长影响2小,主要表现出对 VSMCs 抑制,而在 0.1-10nmol/l 同时抑制 VSMCs和内皮细胞,过高浓度可诱导 VSMCs 凋亡。已有研究表明,全反式维甲酸（ATRA）可抑制 VSMCs 的增殖,在一定程度上促进内皮细胞的生长,加速损伤内皮功能的恢复。本实验研究将紫杉醇和 ATRA 合用,观察抑制原代培养的 VSMCs 增殖的情况,探讨机制并找到合适的剂量,更好地抑制 VSMCs 增殖,从而使 DES 的远期效果及临床应用将有较大的改善及促进作用。方法:用贴块法培养 SD 大鼠胸腹主动脉平滑肌细胞,用 a-SMC-actin 单克隆抗体进行免疫细胞化学鉴定。第 3-6 代用于实验。实验分成紫杉醇组、ATRA 组、紫杉醇与 ATRA 组、乙醇组、二甲基亚砜（DMSO）组、乙醇与 DMSO 组对照组。药物作用细胞 48 小时后观察结果。通过 MTT 法分析药物对细胞的生长抑制情况,流式细胞仪分析药物对细胞周期的影响,及对细胞凋亡影响。每组实验重复 3 次。结果:（1）成功培养出了 VSMC,经倒置相差显微镜及免疫细胞化学鉴定,证实为 VSMC。（2）单独应用紫杉醇,对 VSMC 生长抑制率与浓度（1-100nmol/l）呈正相关。1nmol/l 的紫杉醇对 VSMC 开始表现出抑制作用,抑制率达 17%。10nmol/l 的紫杉醇对细胞的生长抑制率为 27.5%,100nmol/l 时高达 36%。三种浓度的抑制率相比有显著性差异（P<0.05）。与对照组相比有统计学意义（P<0.05）。乙醇组与对照组相比无统计学意义（P=0.172）。（3）单独应用 ATRA 抑制 VSMC 的程度与浓度（1-100nmol/l）呈依赖关系,虽浓度的增加而增强。当浓度为 1nmol/l 时抑制率仅为 8.6%。100nmol/l 时高达 29.8%。三种浓度的抑制率相比有显著性差异（P<0.05）。与对照组相比有统计学意义（P<0.05）。DMSO 组与对照组相比无统计学意义（P=0.205）。ATRA 阻滞细胞于 G1 期,并且随着浓度的增加阻滞作用逐渐增强。浓度为100nmol/l 时 G1 期的细胞占 91.12%。（4）紫杉醇与 ATRA 在 11、00nmol/l浓度下相比,紫杉醇抑制 VSMC 的作用较 ATRA 作用强,并且二者统计学上有显著性差异（p<0.05）。但在 10nmol/l 时相比无统计学差异（p>0.05）。（5）ATRA 与紫杉醇二者合用时抑制 VSMC 作用增强。二者合用有协同作用。乙醇与 DMSO 合用对 VSMC 的生长无影响。二者以

论文目录

• 一、论文
• （一） 中文摘要
• （二） 英文摘要
• （三） 前言
• （四） 材料和方法
• （五） 结果
• （六） 讨论
• （七） 结论
• （八） 附图
• （八） 参考文献
• 二、文献综述
• （一） 正文
• （二） 参考文献
• 三、致谢