阴阳双补方及各拆方对PC12细胞氧化损伤的保护作用及对PLC-γ1-PKCα-PLD信号转导通路影响的研究

论文摘要

目的:观察阴阳双补方（YY）及各拆方（核桃仁、玉竹HY,核桃仁、甘草HG,玉竹、甘草YG,核桃仁H,玉竹Y,甘草G）对Hz02所致PCI2细胞氧化损伤的保护作用及其对PLC-γ1—PKCα—PLD信号转导通路的影响,研究补阳法、补阴法抗神经元细胞氧化损伤的机理,探讨阳虚、阴虚与氧自由基损伤和神经系统病变的关系。 方法:采用PC12细胞为实验对象,用MTT法检测PC12细胞生存率,用公式（药物处理组OD值—模型组OD值）/（对照组OD值—模型组OD值）×100%计算细胞恢复率,筛选出适用的H2O2氧化损伤模型;用正交实验优选出疗效最好的方剂;设对照组和模型组,用阴阳双补方全方及其六个拆方处理细胞,在倒置显微镜下观察PC12细胞形态的改变,用Western blot法检测其对PC12细胞PLC-γ1—PKCα—PLD信号转导通路各蛋白表达的影响。 结果:1.阴阳双补方全方及各拆方对H2O2所致PC12细胞氧化损伤有明显的保护作用,各组细胞形态差异不大,主要区别在于正常和死亡细胞的数量上,与模型组相比,阴阳双补方及各拆方均能提高受损细胞的生存率;2.阴阳双补方全方及各拆方对H2O2所致PC12细胞氧化损伤的保护作用以合方最强,其作用大小依次为:YY>HG>HY>YG>H>Y>G。3.Western blot分析表明,与对照组相比,模型组PLC-γ1—PKCα—PLD信号通路的各蛋白表达水平均下降,当用IC50药物剂量处理受到H2O2攻击的PC12细胞时,阴阳双补方及各拆方能上调PLC-γ1—PKCα—PLD信号通路的各蛋白表达水平。 结论:1.阴阳双补方及各拆方对H2O2所致PC12细胞氧化损伤有保护作用,全方效果最好;补阴、补阳法的合用,尤其是佐使药甘草的应用使本方配伍合理,更好地发挥协同作用。2.H2O2所致的神经细胞氧化损伤是通过下调PLC-γ1、PKCα及PLD表达,部分阻断PLC-γ1—PKCα—PLD信号通路而抑制了细胞增殖、促进了细胞死亡。3.阴阳双补方全方及各拆方通过上调PLC-γ1—PKCα—PLD信号通路的各蛋白表达水平发挥其抗氧化损伤的功能。4.通过药效反证,以神经元氧化损伤为主要病理变化的神经系统疾病,其中医证型以阴阳俱虚居多,而阳虚又重于阴虚。5.阴虚、阳虚与PLC-γ1—PKCα—PLD信号表达和转导减弱密切相关。

论文目录

• 摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料与方法
• 1 实验材料
• 1.1 实验对象
• 1.2 实验药品
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 药物提取
• 2.2 细胞培养
• 2O₂所致PC12氧化损伤的模型'>2.3 MTT检测法筛选最佳H₂O₂所致PC12氧化损伤的模型
• 2.4 正交试验筛选最佳组方
• 1、PKC、PLD蛋白表达水平'>2.5 Western blot分析PLC-γ₁、PKC、PLD蛋白表达水平
• 3 统计学处理
• 结果
• 2O₂所致PC12细胞氧化损伤模型的建立'>1 H₂O₂所致PC12细胞氧化损伤模型的建立
• 2 最佳组方的确立
• 2O₂攻击的PC12细胞形态学的影响'>3 阴阳双补方及各拆方对受到H₂O₂攻击的PC12细胞形态学的影响
• 1表达的作用'>4 阴阳双补方及各拆方对PLC-γ₁表达的作用
• 5 阴阳双补方及各拆方对PKCα表达的作用
• 6 阴阳双补方及各拆方对PLD表达的作用
• 讨论
• 1 自由基与神经系统疾病
• 1—PKC—PLD信号通路在H₂O₂所致PC12细胞氧化损伤中的作用'>2 PLC-γ₁—PKC—PLD信号通路在H₂O₂所致PC12细胞氧化损伤中的作用
• 1—PKCα—PLD信号通路的影响'>3 阴阳双补方及各拆方对PC12细胞氧化损伤的保护作用及对其PLC-γ₁—PKCα—PLD信号通路的影响
• 4 阴阳学说与神经系统疾病
• 5 阴阳双补方方义分析
• 结论
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 附录1 国内应用PC12细胞研究的现状与思考
• 附录2 中药及提取物对体外培养神经细胞的作用