论文摘要
目的:构建pSecTag-OPG真核分泌表达穿梭载体,培养骨保护素（OPG）基因修饰的Cos-7细胞系并检测其表达能力,为基因工程技术治疗牙周病提供基础。 方法:本研究根据编码OPG功能蛋白基因序列,设计并合成了特异性寡聚核苷酸引物,提取293细胞的总mRNA,以OPG基因RT产物cDNA为模板,采用DNA聚合酶PCR扩增,克隆具有抑制破骨细胞功能的OPG基因DNA,并将其重组到载体pSecTag2/B中测序:重组质粒经PCR、Hind Ⅲ单酶酶切及EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶酶切鉴定;脂质体法将目的基因转染至Cos-7细胞,并应用免疫组织化学和Western blot方法证实转染的细胞表达骨保护素。 结果:从293细胞的总RNA中反转录扩增得到编码骨保护素的基因片段,重组质粒pSecTag2/B-OPG经PCR、Hind Ⅲ单酶酶切及EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ双酶酶切,电泳显示均能切下与预期大小相符的片段,经测序证实此基因与GenBahk中[gi:33878-056]提供的序列完全一致;免疫组织化学和Western blot方法检测,在转染OPG基因的Cos-7细胞中有OPG表达。 结论:本研究成功构建了pSecTag2/B-OPG分泌表达穿梭载体,并培养出分泌表达OPG的Cos-7细胞系。
论文目录
相关论文文献
- [1].大鼠促甲状腺激素释放激素受体1基因的克隆及其在COS-7细胞系中的表达[J]. 生物技术通讯 2011(01)
- [2].人硫氧还蛋白基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达[J]. 中国老年学杂志 2011(16)
- [3].多发性骨髓瘤黏蛋白-1基因真核表达载体构建及其在COS-7细胞中的表达[J]. 中国实验血液学杂志 2009(04)
- [4].中国人丙型肝炎病毒复合细胞毒性T淋巴细胞多表位基因真核载体的构建及在COS-7细胞中的表达[J]. 西安交通大学学报(医学版) 2010(04)
- [5].交联聚乙烯亚胺衍生物的构建及其转染COS-7细胞的研究[J]. 现代生物医学进展 2012(10)
- [6].SCIRR 10截短体真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达[J]. 吉林大学学报(医学版) 2011(02)
- [7].恒河猴P21基因在COS-7细胞中沉默位点的验证[J]. 中国实验动物学报 2015(03)
- [8].原发性开角型青光眼致病基因MYOC真核表达质粒的构建及其在COS-7细胞中的表达[J]. 中国生物制品学杂志 2008(08)
- [9].鹅α干扰素基因在COS-7细胞中的瞬时表达及抗病毒功能初探[J]. 浙江大学学报(农业与生命科学版) 2011(04)
- [10].凝血因子Ⅸ无义突变真核表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达[J]. 中国实验血液学杂志 2010(03)
- [11].二苯乙烯苷对过度表达α-synuclein蛋白的转基因COS-7细胞株的影响[J]. 中国康复理论与实践 2008(04)
- [12].尼罗罗非鱼3种Siglecs like融合蛋白在COS-7细胞中的表达及其结合活性的初步研究[J]. 水产学报 2015(03)
- [13].慢性粒细胞白血病bcr/abl的糖基化磷脂酰肌醇锚定修饰及在COS-7细胞膜上的表达[J]. 第三军医大学学报 2008(08)
- [14].血管生成素在COS-7细胞中的表达及其生物活性研究[J]. 中国实验血液学杂志 2008(03)
- [15].牛整合素β1亚基在COS-7细胞中的真核表达[J]. 福建畜牧兽医 2016(03)
- [16].人β-防御素4基因在COS-7细胞中的转染表达[J]. 西部医学 2012(09)
- [17].小鼠FABP3基因全长cDNA的克隆、真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达[J]. 解放军医学杂志 2010(05)
- [18].葡萄糖激酶基因真核表达载体构建及在COS-7细胞中的表达[J]. 西部医学 2008(01)
- [19].香烟提取物对COS-7细胞表面血栓调节蛋白荧光表达的影响[J]. 心血管康复医学杂志 2015(03)
- [20].绵羊干扰素调节因子-1基因在COS-7细胞中转染表达的研究[J]. 中国畜牧杂志 2012(03)
- [21].鸭瘟病毒UL51基因在COS-7细胞中的瞬时表达[J]. 中国兽医科学 2009(10)
- [22].基因枪介导真核表达质粒转染体外培养的COS-7细胞系的实验研究[J]. 生物技术通讯 2008(05)
- [23].环氧合酶2的DNA疫苗构建及其在COS-7细胞中表达[J]. 西南大学学报(自然科学版) 2008(10)
- [24].人BCRP高效稳定表达COS-7细胞系的建立及其药物外排活性鉴定[J]. 广东药学院学报 2014(04)
- [25].siRNA介导的Plk1表达沉默对COS-7细胞影响的研究[J]. 重庆医科大学学报 2010(03)
- [26].人sPD-1-Fc融合蛋白的构建及Cos-7细胞的表达[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2011(06)
- [27].HPV6L1/CtMOMP多表位融合基因在COS-7细胞的表达及其在小鼠的免疫效果观察[J]. 中国生物化学与分子生物学报 2010(08)
- [28].大鼠Neurogenesin-1基因真核表达载体的构建及在cos-7细胞中的表达[J]. 安徽医科大学学报 2009(04)
- [29].人乳头瘤病毒16型E6蛋白在COS-7细胞中表达[J]. 中国热带医学 2009(12)
- [30].EGFP-PDGFRβ融合基因表达载体的构建及其转染COS-7细胞条件的优化[J]. 中国生物制品学杂志 2008(11)