含碲藻胆蛋白的纯化及藻蓝蛋白酶解多肽的抗氧化活性研究

论文摘要

用羟基磷灰石（HA）柱层析法结合硫酸铵分级沉降法,从富碲培养的螺旋藻中分离、纯化得分析级含碲藻蓝蛋白（Te-PC）和含碲别藻蓝蛋白（Te-APC）;对藻蓝蛋白（PC）进行蛋白酶酶解条件的选择和优化,并研究胰蛋白酶酶解产物（Peptide-Trypsin）的组成及抗氧化活性,获得了一些有意义的结果：1.通过HA柱层析对含碲藻胆蛋白进行分离纯化,获得了纯度（A616/A280）为5.59的Te-PC和纯度（A652/A280）为5.16的Te-APC,碲含量分别为611.1和625.3μg·g-1 protein。2. SDS-PAGE显示,Te-PC和Te-APC均含α和β两个亚基。Te-PC的α和β亚基分子量为17.6和18.1 kDa; Te-APC的α和β两个亚基为17.1和18.4.kDa。分别对比Te-PC和PC、Te-APC和APC,从紫外、荧光光谱、ICP-AES、SDS-PAGE以及MALDI-TOF/MS鉴定的结果来看,碲已成功结合到蛋白中,但并没有导致藻胆蛋白结构的显著变化。3.用ABTS·+清除实验评价碲掺入前后PC抗氧化活性的变化情况,结果表明,Te-PC和PC的抗氧化能力随着蛋白浓度的增加而增加,并表现出浓度剂量效应,且Te-PC具有比PC更强的抗氧化活性。4.从水解度（HD）和ABTS·+清除能力两方面综合考虑,对比了碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、木瓜蛋白酶和胃蛋白酶对PC酶解效果的优劣,选择并优化酶解方案。用ABTS·+清除实验评价酶解前后物质的抗氧化活性,发现Peptide-Trypsin抗氧化活性是PC的5倍,Te-PC的3倍。5.通过琼脂糖凝胶电泳对比质粒pBR322 DNA在有无Peptide-Trypsin保护的情况下受AAPH自由基攻击后的断裂情况,结果显示Peptide-Trypsin能够有效保护质粒DNA免受AAPH攻击而造成的氧化损伤。6.利用DEAE-Sepharose柱层析法对Peptide-Trypsin混合物进行初步分离,初步将Peptide-Trypsin分为7个组分,大部分的多肽主要集中在组分1中。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 目录
• 第一章 绪论
• 1.1 自由基与天然抗氧化活性物质概述
• 1.2 一种天然抗氧化物质——藻胆蛋白
• 1.3 含硒蛋白与富碲螺旋藻的培养
• 1.4 抗氧化活性肽的研究进展
• 1.5 选题依据和本课题的研究思路
• 第二章 含碲藻胆蛋白的分离纯化与鉴定
• 2.1 材料与方法
• 2.2 结果与讨论
• 2.3 本章小结
• 第三章 藻蓝蛋白、含碲藻蓝蛋白和酶解多肽的抗氧化活性比较
• 3.1 材料与方法
• 3.2 结果与讨论
• 3.3 本章小结
• 第四章 胰蛋白酶酶解多肽对DNA的保护作用及其初步分离
• 4.1 材料与方法
• 4.2 结果与讨论
• 4.3 本章小结
• 总结
• 参考文献
• 攻读硕士期间发表的论文情况
• 致谢